细胞工程重点总结介绍.doc

细胞工程 绪论 1．根据研究对象的不同，细胞工程分为植物细胞工程和动物细胞工程。 2．克隆羊多莉的诞生证明了动物细胞核具有全能性。 第一章 基本技术 1. 培养基基本成分 大量元素 培养基的大量元素使用量一般在每升几十毫克到几千克。 ①无机盐类 包括C、H、O、N、P、K、Ca、Mg、S 微量元素 微量元素的用量一般低于10-5-10-7克分子浓度。植物所的 微量元素有 Fe、Cu、Zn、B、Mn、Mo、Co ②有机成分：糖、维生素、肌醇、氨基酸、其他 ③植物激素：生长素、细胞分裂素 ④水：不同实验室要求使用不同级别的纯化水 ⑤其它附加成分：琼脂、活性炭、附加复合成分 2. 外植体(explant)：指用于离体培养的活的植物组织、器官等材料。 外植体的三种来源：①生长在自然环境下的植物 ②在温室控制环境条件下生长的植物 ③无菌环境下培养的植物 3. 外植体取材总体原则:①根据培养需求选择植物部位 ②多年生植物注意树龄和季节 ③在不影响培养目的的前提下尽可能选择自然繁殖器官作为外 植体 4. 外植体灭菌顺序：外植体→清洗整理→杀菌剂灭菌→无菌水清洗 外植体灭菌后应及时接种培养 5. 外植体培养条件的控制 ①光照 光照时间影响外植体再生状态；光照强度因植物类型不同而异；光质 研究报道较少 ②温度 适温有利于细胞分裂，而在一定范围内降低培养温度则使细胞的质量 增加。 ③pH 通常使用的pH值范围是5.5—6.5。pH在4.0以下或者7.0以上培养 物就不能正常生长。由于外植体的吸收，引起培养过程中的pH变化； 高压灭菌引起pH值变化 ④气体 生长量与气体含量关系呈现倒“V”形，折点处的气体含量对应最大生 长量 6. MS培养基适合培养的作物类型：适用范围比较广，多数植物组织培养快速繁殖用它作为培养基的基本培养基特别适合于禾谷类植物的花药和花粉培养 ①启动阶段：液泡蛋白体出现是启动脱分化的标志。②演变阶段： 此时细胞核开始向中央移动，质体演变成原质体。③终结期：细胞回复到分生细胞状态，细胞分裂即将开始。激素是离体培养条件下调控细胞脱分化和再分化的主要因素。 细胞分裂素和生长素对于细胞生长和分化具有同等重要的协同作用，它们的量与比值的不同配合，对细胞分化起着重要调节作用。先用生长素处理，后用细胞分裂素处理，有利于细胞分裂而不利于细胞分化；反之，则有利于细胞分化。如果两者同时处理，则可促使分化频率的提高。 器官发生:植物的离体器官发生是指培养条件下的组织或细胞团（愈伤组织）分化形成不定根、不定芽等器官的过程。 不定根、不定芽是指在一些非正常发生部位形成的根或芽，离体培养中通常是指从愈伤 组织上发生的根或芽。 器官发生方式：①先芽后根；②先根后芽；③根芽同步发生。 器官发生过程：①经过愈伤组织的器官发生；②不经过愈伤组织的器官发生。 器官发生的影响因素：①起始材料 母体植物的遗传基础和外植体类型及其生理状态； ②激素 生长素和细胞分裂素在离体器官分化调控中占有主导地位，CA3、PSK在器官分化中也具有一定调控作用；③光照 光照是离体培养中比较复杂的调节因子，光照时间、强度以及光质对器官分化均有影响； ④基因调控 体细胞胚的定义：离体培养下没有经过受精过程，但经过了胚胎发育过程所形成的胚的 类似物（不管培养的细胞是体细胞还是生殖细胞），统称为体细胞胚或胚状体。 体细胞胚的界定：1）体细胞胚是离体培养的产物，只限于离体培养范围使用，以区别于无融合生殖胚。2）体细胞胚起源于非合子细胞，以区别于合子胚。3）体细胞经过了胚胎发育过程，以区别于离体培养中器官发生形成个体的途径。 体细胞胚的形成途径：1）体细胞胚从外植体上直接发生（诱导阶段和胚胎发育阶段）；2）间接发生 经过愈伤组织的体细胞胚形成→经过悬浮细胞的体细胞胚形成；3）愈伤组织 诱导愈伤组织形成→愈伤组织胚性化→球性胚形成→子叶胚期；4）悬浮细胞