20学时微生物实验讲义要点分析.doc

微生物学实验 （生物科学基地班、创新班、生物工程、生物技术、食用菌等专业共用） 任课教师：教学时数：学时 实验周数： 周 微生物实验目录（学时） 实验一： 实验三：土壤自生固氮菌的分离纯化 实验四：稀释平板计数法 实验五：显微镜的使用 实验六：微生物的显微直接计数法（血球计数板） 实验七：细菌的简单染色与革兰氏染色 实验八：细菌的荚膜染色 实验九：黑曲霉水浸片的制备与观察 微生物学实验规则和安全 普通微生物学实验课的目的是：训练学生掌握微生物学最基本的操作技能，了解微生物 学的基本知识，加深理解课堂讲授的某些微生物学理论。同时，通过实验，培养学生观察、 思考、提出问题、分析问题和解决问题的能力，实事求是、严肃认真的科学态度以及敢于创 新的开拓精神；树立勤俭节约、爱护公物的良好作风。 ? 微生物学实验室是一个严肃的实验场所，虽然普通微生物学实验所用的微生物材料一般 为非致病菌或条件致病菌，但许多微生物是否具有致病性不是绝对的，与其数量、条件、感 染途径等有关，所以在实验操作中，必须将所有的微生物培养物都看成是具有潜在致病性的。 为了上好微生物学实验课，并保证安全，特制定如下规则和安全措施： 1.每次实验前必须对实验内容进行充分预习，以了解实验的目的、原理和方法，做到心中 有数，思路清楚。 2．在整个实验过程中必须穿上实验服，留长发者，必须将长发挽在背后。实验台上除了记 录本和笔(记录笔和记号笔)以外，不准堆放任何个人物品。 3．认真及时做好实验记录，对于当时不能得到结果而需要连续观察的实验，则需记下每次 观察的现象和结果，以便分析。? 4．实验室内应保持整洁，勿高声谈话和随便走动，保持室内安静。 5．实验时小心仔细，全部操作应严格按照操作规程进行，禁止用嘴吸取菌液或试剂，万一 遇有盛菌试管或瓶不慎打破、皮肤破伤等意外情况发生时，应立即报告指导教师，及时处理， 切勿隐瞒。 6．实验过程中，切勿使乙醇(酒精)乙醚、丙酮等易燃药品接近火焰。如遇火险，应先关掉火源，再用湿布或沙土掩盖灭火。必要时用灭火器。 7．使用显微镜或其他贵重仪器时，要求细心操作，特别爱护。显微镜的目镜在使用前后必 须用浸有乙醇(酒精)的透镜纸擦净。对消耗材料和药品等要力求节约，用毕后仍放回原处， 严禁将药匙交叉使用。 8．每次实验完毕后，必须把所用仪器抹净放妥，将实验室收拾整齐，擦净桌面，如有菌液 污染桌面或其他地方时，可用3%来苏尔液或5%石炭酸液覆盖半小时后擦去，如系芽孢杆菌，应适当延长消毒时间。凡带菌之工具(如吸管、玻璃刮棒等)在洗涤前须浸泡在3%来苏尔液中进行消毒。 9．每次实验需进行培养的材料，应标明自己的组别及处理方法，放于教师指定的地点进行培养。实验室中的菌种和物品等，未经教师许可，不得携出室外。 10．每次实验的结果，应以实事求是的科学态度填入报告表格中，力求简明准确，认真回答 思考题，并及时汇交教师批阅。 11．离开实验室前将手洗净，注意关闭门窗、灯、火、煤气等。 实验一 培养基的配制 一、实验目的 学会一般培养基的制备原理、方法。 二、实验原理 培养基是按照微生物生长繁殖所需要的各种营养物质用人工方法配制而成的机制。其中含有水分、碳水化合物、含氮化合物、无机盐及各种必要的维生素。培养基可以为微生物的生长提供能源、组成菌体细胞的原理及调节代谢活动。由于不同微生物的营养类型不同，对营养物质的要求也各不相同，因此，需要配制不同种类的培养基。一般培养细菌常用牛肉膏蛋白胨培养基，培养放线菌常用淀粉培养基，培养霉菌常用马铃薯培养基，培养酵母常用麦芽汁培养基。 培养基除了要满足微生物生长所需要的各种营养物质外，还应保证微生物所需要的其他生活条件，如适宜的酸碱度、渗透压等，因此，根据不同种类微生物的要求，应将培养基调节到一定的pH范围，如细菌培养基中性偏碱，放线菌培养基偏碱，霉菌、酵母菌培养基偏酸。 根据研究的不同，可以将培养基制成固体、半固体和液体三种形式，固体培养基的成分与液体相同，仅在液体培养基中加入凝固剂作为支持物，通常加入1.5%-2%的琼脂，半固体加入0.3%-0.5%琼脂作为支持物，有时也可以用明胶或是硅胶作为凝固剂。 三、实验溶液和试剂 牛肉膏，蛋白胨，NaCl，琼脂，1mol/LnaOH，1mol/LHCl。 仪器或其他用具 试管，三角瓶，烧杯，量筒，玻棒，培养基分装器，天平，牛角匙，高压蒸气灭菌锅，pH试纸（pH5.5～9.0），棉花，牛皮纸，记号笔，麻绳/皮筋，纱布等。 操作步骤 称量按培养基配方比例依次准确地称取牛肉膏，蛋白胨，NaCl放入烧杯中。牛肉膏常用玻棒挑取，放在小烧杯或表面皿中称量，用热水溶化后倒入烧杯。蛋白胨很易吸湿，在称取时动作要迅速。 溶化在上述烧杯中