微生物A实验学生用介绍.doc

实验一 环境中微生物的检测 一、实验目的 1、了解环境中微生物的分布状况。 2、学习常见环境中微生物的检测方法。 3、体会无菌操作的重要性。 4、初步认识微生物的菌落。 二、实验原理 微生物“无处不在”，但肉眼看不到，要想验证微生物的存在，就需要把被检测的样品接种到适合它们生长的环境（培养基上）进行培养，经过一定时间的培养，如果被检测的样品或环境中有微生物存在，便会在培养基表面形成肉眼可见群体，即菌落。 三、实验器材 培养基：牛肉膏蛋白胨琼脂培养基；培养器皿：无菌培养皿；酒精灯、记号笔、培养箱等。 四、实验方法 （一）平板培养基的制备 1、融化培养基 2、按无菌操作倒平板，倒10ml左右，放平凝固后即制作完毕。 （二）、微生物检测 1、贴标签于平板培养基底部，标签注明：检测项目、班级、小组。 2、检测项目与检测方法 ⑴ 空气中微生物检测：在检测环境中，打开培养皿盖在空气中暴露3min。 ⑵ 手指上微生物检测：按无菌操作，用手指触摸平板培养基。 ⑶ 头发上微生物检测：取短头发一根放至平板培养基上。 4）对照 3、培养：将上述检测培养皿及对照培养皿倒置于28℃恒温箱培养3～5 实验二 细菌的简单染色与油镜的使用 一、实验目的 1、掌握油镜的工作原理、使用方法和保养技术。 2、掌握细菌简单染色的技术。 二、实验原理 显微镜的分辨力D为看清两点间最小距离。公式：D=λ/2N·A。与光的波长（λ）和数值孔径（N·A）有关。N·A=n·sina/2，n为物镜与玻片标本间媒介的折射率，α为镜口角，即被观察的物体与镜筒的夹角。 油镜放大100倍，它与其他物镜不同的是，观察时镜头与玻片标本间媒介是一层油质，常选用香柏油，香柏油的折射率为1.54，另外，镜口角也增大，结果看清两点间距离更小，即放大倍数增大。 细菌无色透明，个体微小（0.5-1um））1～2minG+）和革兰氏阴性菌（G-）两大类的一种实验室常用的染色，是细菌学上最常用的鉴别染色法。 三、实验器材 1、菌种：大肠杆菌、枯草芽孢杆菌 2、染色液和试剂：结晶紫、番红、95%乙醇、卢戈氏碘液、无水乙醇、香柏油 3、显微镜、擦镜纸、接种环、载玻片、吸水纸、酒精灯、洗瓶、废液缸等。 四、实验方法 （一）制片 1、涂菌：取干净载玻片一块，在载玻片的中央加一滴蒸馏水，按无菌操作法从菌种斜面挑取少量菌体与水滴充分混匀，涂成薄膜，注意取菌不要太多。 2、干燥：让涂片自然晾干或者在酒精灯火焰上方文火烘干。 3、固定：手执玻片一端，让菌膜朝上，通过火焰2～3次固定（以不烫手为宜）。不能将玻片在火上烤，否则细菌形态毁坏。 （二）染色 1、初染：在玻片上滴加结晶紫染液，染1min后，用水洗去剩余染料。 2、媒染：滴加卢戈氏碘液，1min后水洗。 3、脱色：滴加95%乙醇脱色30s，水洗。 4、复染：滴加番红染液染色2～3min 一、实验目的 1、自制水玻片观察霉菌、酵母菌的形态特征。 2、学习如何观察已知霉菌的分类特征，掌握对未知霉菌怎样进行初步鉴定的方法。 二、实验原理 霉菌是丝状真菌，菌体呈丝状，菌体的基本单位是菌丝。霉菌的菌丝有分化，如，营养菌丝分化成假根、吸器等，气生菌丝分化形成子实体。不同霉菌的子实体的形成不同，它们是真菌分类的重要依据，本实验的目的就是观察不同霉菌如：青霉、曲霉、根霉它们的菌丝分化特征。 三、实验器材 观察菌株：根霉、青霉、曲霉、酿酒酵母。蒸馏水、载玻片、盖玻片、解剖针、显微镜、95％酒精、擦镜纸。 四、实验方法 （一）制水浸制片观察霉菌? 在载玻片上滴加一滴蒸馏水，用解剖针从生长有霉菌的平板中挑取少量带有孢子的霉菌菌丝，放入载玻片上的液滴中，仔细地用解剖针将菌丝分散开来。盖上盖玻片，先用低倍镜，必要时转换高倍镜观察并绘图。 根霉：观察假根、匍匐枝、孢子囊梗、孢子囊、孢子的形状与特征。 青霉：观察分生孢子梗、梗基与小梗、分生孢子的形状与特征。 曲霉：观察分生孢子梗、顶囊、小梗、孢子的形状与特征。 2、酵母菌观察： 在载玻片上滴加一滴蒸馏水，用接种环从生长有酵母菌的平板中挑取少量酵母菌，放入载玻片上的液滴中，使其悬浮，盖上盖玻片，先用低倍镜，必要时转换高倍镜观察并绘图。 酵母菌：卵圆形细胞、出芽生殖。 五、实验作业 给出根霉、青霉、曲霉酵母菌的个体形态图，并注明各部位名称。 实验五 培养基的制备与灭菌 一、实验目的 1、掌握培养基制备的原理和方法。 2、掌握高压蒸汽灭菌的原理和方法 二、实验原理 培养基即人工配制的适合不同微生物生长繁殖和积累代谢产物的营养基质。不同的微生物对营养需要不同，在培养基配置时一定要根据微生物的需求加入适合的碳源、氮源、无机盐和水。培养基配好后必须经过灭菌方能使用。高压蒸汽灭菌是制备培养基常用的灭菌方法