耐药结核病诊断新技术.ppt

工作原理 在一定环境下，DNA双链在其长度和序列一定时，Tm值也一定， 当发生错配时，Tm值下降，下降的幅度与发生错配的碱基数目、类型和位置有关。 ΔTm 96%利福平耐药突变发生在rpoB507-533共81bp区域内 利福平耐药突变检测体系示意图 根据靶序列熔点的变化，检测rpoB基因 是否含有突变，获得利福平耐药信息 根据不同的ΔTm值可以判断出ropB可能不同的碱基发生突变 根据不同的ΔTm值可以判断出ropB可能不同的碱基发生突变 异烟肼耐药突变检测体系示意图 通过检测 katG315、inhA 启动子和、ahpC 启动子区、inhA94 、密码子的突变与否确定样品对异烟肼的耐药性。 世界卫生组织（WHO）自1997年起，每年都会发布一个全球结核病报告。报告的主要目的是为全世界提供全球、地区及国家关于结核病流行、预防、诊断和治疗方面的综合性必威体育精装版消息。 2016年10月14日，WHO发布了2016年全球结核病报告，数据涵盖了202个国家和地区的99%的人口和结核病病例。 2015年，世界范围内估计有1040万新发病例，新发病例中有120万（11%）HIV患者。 2015年全球估计有48万新发的MDR-TB病例和10万耐利福平结核病（RR-TB）病例。印度、中国和俄罗斯三个国家占所有这58万病例的45%; 2015年有140万人死于结核病，另外40万是TB/HIV双重感染人群死亡。虽然在2000到2015年间，结核病死亡以22%的速度在下降，但2015年结核病仍然排在全部死亡原因中的前十名。 * 即将出台的结核病防治“十三五”规划要求，到2020年，100%地市级定点医疗机构需具备开展药敏试验、菌种鉴定和分子生物学诊断能力，80%东中部、70%西部县区需具备开展分子生物学检测的能力。 * 多数研究报告提示：耐药的发生与结核杆菌的基因突变有关。总体上是基因一个或几个核苷酸突变（表现增加、缺失、替代），造成核苷酸编码错误致氨基酸错位排列，影响药物与靶位酶结合产生耐药。 * * * 6h，MTC与21种NTM即可检测出来，涵盖目前国内常见的20多种NTM！直观，简洁！ 我们的MSI产品，能在6小时内鉴别22种分枝杆菌，几乎涵盖了国内分离的NTM致病菌。 这就给临床提供了一款快速、可靠的分枝杆菌鉴定产品，为用药提供了可靠的科学依据。 * 在一定环境下，DNA双链在其长度和序列一定时，Tm值也一定，当发生错配时，Tm值下降，下降的幅度与发生错配的碱基数目、类型和位置，通过比较所检测样品与阳性对照（野生型标准菌株H37RV）之间熔解曲线的熔点(Tm值)的差异判断样品是否发生突变。当所有通道中样品的熔点与野生型熔点均一致(误差不超过1℃)时判定为野生型；若所有通道中任意一个(或者多个)通道中样品的熔点低于阳性对照2℃以上(ΔTm ≥2℃)，判定为突变型，表明样本中结核分枝杆菌耐药。 * * * * 耐药性结核病诊断新技术 主讲人：吴寿强 时间：2016年7月28日 主要内容 一、概述 二、基因芯片技术 三、熔解曲线技术 全球范围内结核病疫情严重 患病率高： 新发患者1040万/年，其中有120万（11%）HIV患者； 死亡率高：每年死亡人数达140万（13.46%），HIV/TB:死亡人数40万（33.33%）； 耐药率高： 48万新发的MDR-TB病例和10万耐利福平结核病（RR-TB）病例； 接受MDR检测、报告和治疗的MDR-TB不足1/3，接受治疗的MDR-TB治愈成功率只有50% 2016年全球结核病报告 2015年全球估计MDR-TB患者数 结核病快速及时诊断是结核病防控重要因素 灵敏准确 操作简便 检测时间短 闭管检测 检测位点全面 对新型耐药检测技术的要求 基因芯片技术 结核病耐药与基因 64-68% rps L 基因突变 70% emb B基因突变 70% 65% 耐药 基因 93% 95% 95% rpo B基因突变 利福平 异烟肼 50-70% kat G基因突变 5-10% inh A基因突变 6-13% ahp C基因启动子区域突变 链霉素 乙胺丁醇 多数研究报告提示：耐药的发生与结核杆菌的基因突变有关。总体上是基因一个或几个核苷酸突变（表现增加、缺失、替代），造成核苷酸编码错误致氨基酸错位排列，影响药物与靶位酶结合产生耐药 基因芯片（原理） 激光共焦扫描仪 软件判读 样品制备仪 杂交仪 基因芯片方法是基于结核杆菌的利福平和异烟肼耐药性相关的rpoB/katG/inhA的基因位点发生突变，通过PCR扩增、和固定于尼龙膜上的寡核苷酸探针进行杂交、扫描