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滨州职业学院教案 No______ 课程 植物生理 2005 /2006 学年第二学期 教师 本文档由【中文word文档库】提供，转载分发敬请保留本信息； 中文word文档库免费提供海量范文、教育、学习、政策、报告和经济类word文档。 授课日期 班 级 课 题： 实验四 叶绿体色素的提取与测量 教学目标：明确叶绿体色素的种类及其提取和分离的方法。 重点难点：明确叶绿体色素的种类及其提取和分离的方法。 教学方法：实验实习 教 具： 教学参考书：《植物学》 课后作业：1. 记录实验结果。 2. 算出所测植物组织的渗透势。 教学札记：明确叶绿体色素的种类及其提取和分离的方法。 编写日期： 滨州职业学院教案附页 目的要求 叶绿体色素的提取与分离 目的 明确叶绿体色素的种类及其提取和分离的方法。 叶绿体色素的理化性质 目的 从光合色素的结构出发 , 认清叶绿体色素的主要理化性质及观察方法。 叶绿素的定量测定 实验目的 植物叶绿素的含量与光合作用和氮素营养有密切关系 , 因此测定植物叶绿素的含量对合理施肥、育种及植物病理研究有着重要意义。本实验要求掌握用分光光度法测定叶绿素含量的方法。 材料及用具 叶绿体色素的提取与分离：托盘天平、培养皿、滤纸、玻棒、烧杯、漏斗、研钵、滴管、漏斗架、坩埚、三角瓶、剪刀、 95% 酒精、汽油、碳酸钙、无水碳酸钠、石英砂。 叶绿体色素的理化性质：分光镜、铁三角架、研钵、分液漏斗、酒精灯、石棉网、滴管、 小烧杯、试管、试管架、玻棒、移液管、 95% 酒精、石油醋、醋酸铜粉、氢氧化锦片、 50% 醋酸。 叶绿素的定量测定：分光光度计、烧杯、滤纸、移液管、天平、剪刀、试管、漏斗、研钵、容量瓶、 80% 丙酮、石英砂、碳酸钙粉。 内容方法 叶绿体色素的提取与分离 1. 色素的提取。将剪碎的鲜叶 8～10g 95% 酒精 5～10ml 20ml 左右的酒精,充分混匀,以提取匀浆中的色素,3～5min 1Og 左右元水碳酸纳以除去提取液中的水分,将提取液转入另一三角瓶中,加塞待用。 干叶提取,可先取植物新鲜叶片在 105 ℃下杀青，再在 70～80 ( 如不及时用 , 可避光密闭贮存 )。称取叶粉 2g, 放入小烧杯中，加人 95% 酒精 20～30 2. 色素的分离 。取一圆形滤纸，在其中心戳一圆形小孔 。另取一张滤纸 , 剪成长 5cm 、宽 1.5cm 的纸条 , 将它捻成纸芯。将纸芯一端蘸取少量提取液使色素扩散的高度限制在 0.5cm 以内 , 风干后再蘸, 反复操作数次。然后将纸芯蘸有提取液的一端插人圆形 滤纸的小孔中 , 使与滤纸刚刚平齐 ( 勿突出 ) 。埔塌内加适量元色汽油 , 把插有纸芯的圆 形滤纸平放在上 , 使纸芯下端浸入汽油中 , 进行层析。这时纸芯不断吸上汽油，并把其上 的色素一起沿滤纸向四周扩散，不久就可看到被分离的各种色素的同心圆环 , 叶绿素 b 为 黄绿色 , 叶绿素 a 为蓝绿色 , 叶黄素是鲜黄色 , 胡萝卡素是橙黄色。用铅笔标出滤纸上各种色素的位置并注明其名称。 注意事项 1. 用于色素分离的提取液浓度应高些 , 蘸取提取液的速度不直太快 , 风干后再蘸 , 浓度不高时分离效果较差。 2. 分离图可在暗中保存 , 以免色素被光氧化。 叶绿体色素的理化性质 将本实验第一项中提取的叶绿体色素溶液用95% 酒精稀释一倍，进行以下实验 : 1. 皂化作用。吸取叶绿体色素提取液 5ml 放入试管内 , 再加人少量氢氧化钾片，充分摇匀 , 片刻后 , 加入 5ml 石油醚, 摇匀 , 再沿试管壁慢慢加入 l～1.5ml , 轻轻摇匀 , 静置试管架上 , 随即可看到溶液逐渐分为两层 , 下层是酒精溶液 , 其中溶有皂化叶绿素 a 和叶绿素 b ( 还有少量叶黄素 ); 上层是石油醚溶液 , 其中溶有黄色的胡萝卡素和叶黄素。 将上下两层溶液用分液漏斗分离，分别装人试管内，加塞放于暗处，以供观察吸收光谱用。 2.H+ 和 Cu+ 对叶绿素分子中镁的取代作用。吸取叶绿体色素提取液约 5ml 放人试管中 , 加入 50% 醋酸数滴，摇匀后，观察溶液的颜色有何变化。 当试管中溶液变成褐色后，倾出一半于另一试管中，投入醋酸铜粉末少许，微微加热 , 然后与未加醋酸铜的试管比较，观察颜色有何变化。 3. 叶绿素的荧光现象。取较浓的叶绿体色素提取液 5ml, 放人试管中 , 观察光线透过叶绿素提取液和叶绿素提取液在暗背景下的反射光的颜色有何不同 ? 4. 叶