WatersHPLC2695型高效液相色谱仪操作规程.docVIP

Waters HPLC 2695操作规程 一、日常开机步骤 1. 制备新鲜流动相和清洗液 流动相 水 纯净水。 缓冲剂 首先溶解盐，调节pH值，然后过滤除去不溶解的物质，缓冲盐浓度≤100mMol。 四氢呋喃 使用不稳定的THF时，请确保溶剂是新鲜的。先前打开过的THF瓶含有过氧化物杂质，将导致基线漂移。 有机相 原装进口的色谱纯。 清洗液 洗针液 根据样品和流动相的化学性质选用洗针液，确保所有溶液和缓冲剂都是易混合和可溶解的，最好选择与最终梯度条件相似的洗针液。 推荐使用的洗针液：80%甲醇/20%水 色谱条件 洗针液 缓冲水溶液，反相 80%有机相/20%水 非水溶液，反相 100%甲醇 正相 流动相 GPC 流动相 离子交换 水 清洗柱塞密封垫（seal wash）的溶液 含5% ~ 10%甲醇的超纯水（一般放在弱洗溶液中） 注意：所有流动相和清洗液均需盛放于硼硅玻璃制作的高质量实验室玻璃器皿中，混合均匀并在使用前要经过0.45μm的膜式过滤器的过滤，超声脱气1-2min。 2. 开机及系统准备 2.1 开机 先打开电脑，再依次接通2695分离单元、检测器的电源。接通2695分离单元后，约20秒仪器自检，约1分钟后，显示主屏幕，此时继续各部件的初始化，待主屏幕上主标题区出现“Idle”仪器自检通过，表示开机测试正常，之后启动Emperor软件。 A管带黄色标记、B管带蓝色标记号、C管带红色标记、D管带绿色标记，绿色管为冲洗泵头用，白色管为冲洗进样器用，将各泵头放到相应的溶剂瓶中备用。 2.2灌注 (Prime) 当溶剂的管路是干的或存在较多气泡不易排出时，需进行灌注。 2.3 平衡色谱柱 在“Status”界面上，按流动相比例设定各通道溶剂比例后，设置流速，平衡色谱柱30-60min。（可在工作站中设置）。 2. 样品的配制 所有样品均需经过滤膜过滤，置于液相小瓶内，达到样品瓶的1/3以上。 二、基本操作 1. 创建项目 双击电脑桌面图标“Empower”，用户名输入“system”密码输入“manager”选中操作项目和色谱系统→确定。在菜单栏“管理”→创建新项目→选择父项目→下一步→输入表空间值→按“下一步”逐步设置→完成→管理→改变/项目，在该窗口切换项。 2. 新建仪器方法 进入“运行样品”后，选择“创建方法组”调用方法组编辑向导。出现“新建方法组—选择仪器方法”，单击“新建”来创建新的仪器方法，此时出现“仪器方法编辑器”界面，按相关的要求填写各参数，根据需要编辑不同的方法，编辑完毕后单击“文件”，“另存为”后出现“保存仪器方法”对话框，输入此方法用于的测定药品名称，单击“保存”。 3. 新建方法组 选择所需的方法名称，点击“下一步”，输入方法组名（与方法名一致），即完成方法组的建立。 4. 监视基线和单次进样 4.1监视基线 点击平衡系统/监视基线图标→输入仪器方法→平衡监视器，开始按设置方法平衡基线。待基线平衡、压力平稳后，点击“中断样品组”开关，终止观察基线。 4.2 单进样 当进行单进样时，在“运行样品”的“单进样”界面中输入“样品名”“功能”“方法组”“进样体积”“运行时间”等；然后点击“单进样”图标，或选择上方的“进样”再选择“进样”，这样就开始了单次进样。单次进样完成分析后系统即停止检测（流动相正常流动）。 当要对分析方法做修改时，通过中断运行样→方法组仪器随时改变方法→另存覆盖→平衡监视→执行新方法，可重复至最佳分析方法确定。 5. 运行样品组 当多进样时，在“运行样品”的“样品”界面点击“样品瓶”输入所有样品分别所在位置（输入所在编号），接着分别设定“样品名称”、“进样体积”、“进样数”、“功能”等采集参数，在“方法组”中选择需要的方法组，在“运行时间”中设定相关的时间。 开启绿色“运行”或点击“进样”，在选择“运行样品组”，输入样品组名称，运行模式（只运行），适应性模式（出错时继续），点击运行。 如果有另外一组样品需要运行的话，也可返回“样品”表单继续编辑新的一组样品，随后单击“运行”，即可在此样品组结束后继续运行新的一组。 如需修改正在运行样品的测试样品，在“运行样品”的“正在运行”界面，点击“编辑”菜单中“改变当前运行样品的信息”，点击确定，修改样品以后，须重新点击“运行”。 三、数据处理 1. 利用处理方法向导建立处理方法 1.1 单击Empower软件Pro界面中的“浏览项目”进入数据浏览画面，开始查找数据。 1.2 选择“通道”，进入通道画面。选择需处理的数据，选择菜单“工具-查看”打开。 1.3 出现“查看-主窗口”，单击菜单“文件-新建-处理方法”，出现新建处理方法对话框，在“处理类型”选择“LC”，“积分算法”选择“