分解纤维素的微生物的分离知识点.ppt

　　纤维素酶是一种复合酶，一般认为它至少包括三种组分，即CX酶、 C1酶和葡萄糖苷酶，前两种酶使纤维素分解成纤维二糖，第三种酶将纤维二糖分解成葡萄糖。 1、碳源 2、自养型微生物利用无机碳源， 异养型微生物利用有机碳源； (2)①诱变组中菌落周围的透明圈与对照组相比较大，说明诱变育种获得了高纤维素酶产量的菌株②诱变组中菌落周围的透明圈与对照组相同，说明诱变育种没有使菌株发生相关变化 ③诱变组中菌落周围的透明圈与对照组相比较小，说明诱变育种获得了低纤维素酶产量的菌株 * * * 课题3 纤维素酶： 纤维素 C1酶 Cx酶 纤维二糖 葡萄糖苷酶 葡萄糖 甲 乙 在2支20mL的试管中，分别放入1×6cm的滤纸条，再分别加入pH为4.8、物质的量浓度为0.1mol/L的醋酸-醋酸钠缓冲液10mL、11mL。在加入10mL缓冲液的试管中加入1mL纤维素酶（70~80U/mL）。将二支试管固定在50mL的锥形瓶中，在摇床上以140r/min的转速振荡反应1h，观察结果。 4、纤维素酶活性的测定实验： .纤维素分解细菌的筛选： 1.方法： 刚果红染色法这种方法能够通过颜色 反应直接对微生物进行筛选 刚果红可以与纤维素形成红色复合物，当纤维素被纤维素酶分解后，红色复合物无法形成，出现以纤维素分解菌为中心的透明圈，我们可以通过是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌。 2.原理： 土壤取样 选择培养 梯度稀释 将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上 挑选产生透明圈的菌落 （此步可以省略） 2、选择培养的操作方法 将土样加入装有30ml选择培养基的锥形瓶中，将锥形瓶固定在摇床上，在一定温度下振荡培养1-2d，直至培养液变混浊。 吸取一定量的培养液，转移至另一瓶新鲜的选择培养基中，以同样的方法培养到培养液变混浊。 选择培养 （富集培养） 增加纤维素分解菌的浓度，以确保能够从样品中分离所需要的微生物。 1、目的： 刚果红染色法 方法一：先培养微生物，再加入刚果红进行颜色反应 方法二：在倒平板时就加入刚果红 为了确定分离得到的是纤维素分解菌，还需要进行_____________实验，纤维素酶的发酵方法有______ 发酵和______ 发酵。纤维素酶测定方法是对纤维素酶分解滤纸等纤维素所产生的________ 含量进行定量测定。 发酵产纤维素酶 液体 固体 葡萄糖 碳源 氮源 生长因子 无机盐 水 微生物需要的五大类营养要素物质 （一）微生物需要的营养物质及功能 概念 来源 常见的生长因子 微生物生长不可缺少的微量有机物 酵母膏、蛋白胨、动植物组织的提取液 维生素、氨基酸、碱基等 生长因子 思考 是否培养所有微生物的培养基中都需要 加生长因子？ 有机碳源：如糖类 无机碳源：如CO2 5自养型微生物的能源是光能或无机物氧化释放的化学能； 异养型微生物的能源是和碳源一样（有机碳源） 3、自养型微生物利用无机氮源， 异养型微生物可能利用无机氮源也可能利用有机氮源 4、有机碳源也是异养型微生物的主要能源 8．有些微生物能合成纤维素酶，通过对这些微生物的研究和应用，使人们能够利用秸秆等废弃物生产酒精，用纤维素酶处理服装面料等。纤维素酶可以通过微生物发酵来生产，为了提高酶的产量，请你设计一个实验，利用诱变育种的方法，获得产生纤维素酶较多的菌株。 (1)写出实验步骤： ①______________________________________________. ②制备含有___________的固体培养基。 ③_________________________________________________________________________. ④__________________________________________________________________________. (2)预期实验结果结论： 〖8.答案〗（1）①将培养好的菌株分为两组，一组用一定剂量的诱变剂处理，另一组不处理作对照。③把诱变组的大量菌株接种到多个含有纤维素的固体培养基上，同时对照组接种未处理的菌株。把它们置于相同的条件下培养④一段时间后，取培养基用刚果红染色，观察记录菌落周围透明圈的大小情况 *