单克隆抗体的制备（参考）.pptVIP

2.2.2单克隆抗体 1、简述单克隆抗体制备的过程。 2、了解单克隆抗体在医学实践中的应用。 【学习目标】 什么是抗体？抗体是怎么产生的？ 抗体是机体受抗原刺激后产生的、并能与该抗原发生特异性结合的具有免疫功能的球蛋白。 知识回顾 （一）获得抗体的传统方法（血清抗体） 1、把某种抗原反复注射到动物体内，使动物产生抗体，然后，从动物血清中分离出所需的抗体。 2、血清抗体的缺点： 产量低，纯度低，特异性差。 为了解决血清抗体产量低、纯度低，特异性差这一难题，科学家们进行了多年的研究和探索。他们发现，哺乳动物感染病原体后，体内会形成相应的B淋巴细胞。B淋巴细胞能分泌抗体，凝集或杀死这些病原体。动物在免疫反应的过程中，体内产生的特异性抗体的种类可多达百万种以上，但是每一个B细胞只分泌一种特异性抗体。 所以，要想获得大量的单一抗体，必须克隆单一的B淋巴细胞，形成细胞群。 1、B淋巴细胞是一种高度分化的细胞，有没有可能通过细胞培养进行无限增殖？ 不可能 2、我们学过的什么细胞具有这样的能力？ 癌细胞 3、有什么办法让B淋巴细胞也具有这样的能力？ 细胞融合 用单个B淋巴细胞进行（无性繁殖）克隆，得到的基因型相同的细胞群能够分泌一种化学性质单一、特异性强的抗体。 单克隆抗体的概念： （二）单克隆抗体的制备过程 创始人：米尔斯坦 柯勒 1975年设计实验 1984年获得诺贝尔生理学和医学奖 单克隆抗体的制备 例题1、科学家用小鼠骨髓瘤细胞与某种细胞融合，得到杂交细胞，经培养可产生大量的单克隆抗体，与骨髓瘤细胞融合的是（ ） A、经过免疫的B淋巴细胞 B、不经过免疫的T淋巴细胞 C、经过免疫的T淋巴细胞 D、不经过免疫的B淋巴细胞 2. 单克隆抗体制备过程中，骨髓瘤细胞和B淋巴细胞 诱导融合后，要用特定培养基筛选出杂交瘤细胞， 在这种培养基上不能存活增殖的细胞是（ ） ①淋巴细胞　②小鼠骨髓瘤细胞　③B淋巴细胞自身融 合细胞　④小鼠骨髓瘤细胞自身融合细胞　 ⑤杂交瘤细胞 A． ②④ B．①③⑤　　 C． ①②③④ 　 D．②③ 1.在制备单克隆抗体的过程中，选用哪两种细胞进行融合？为什么选择这两种细胞？ 浆细胞和骨髓瘤细胞 浆细胞能产生单一抗体，但不能无限增殖；骨髓瘤细胞能无限增殖，但不能产生单一抗体。 2、在这过程中进行了几次筛选？分别在哪个步骤进行筛选？ 两次筛选。第一次在B细胞和骨髓瘤细胞融合以后筛选出杂交瘤细胞； 第二次在杂交瘤细胞中筛选出能产生所需抗体的杂交瘤细胞。 3、单克隆抗体具有哪些优点？ 特异性强，灵敏度高，可大量制备 3、动物细胞融合的目的中最重要的是（ ） A、克服远缘杂交不亲和 B、制备单克隆抗体 C、培育新物种 D、生产杂种细胞 （三）单克隆抗体的应用 1、作为诊断试剂：在临床生化诊断、病理组织定位、体内肿瘤的定位等,与常规抗体相比,具有准确、高效、简易、快速特点. 用抗人绒毛膜促性腺激素单克隆抗体做成的“早早孕诊断试剂盒”，灵敏度很高。在妊娠第8天就可以做出诊断。比原来的诊断方法提前了10天左右，可以避免孕妇在不知道妊娠的情况下因服用药物而对胎儿造成不利影响。该方法检测的准确率在90%以上。 2、用于治疗疾病和运载药物： 主要用于癌症治疗。 生物导弹：抗癌细胞的单克隆抗体+放射性同位素+化学药物或细胞毒素。（单克隆抗体：导向。准确找到癌细胞位置，原位杀死癌细胞。） 4、研究单克隆抗体治疗癌症的思路是（ ） A．利用单克隆抗体特异性地对抗癌细胞 B．以单克隆抗体作抗癌药物杀死癌细胞 C．抗癌物质在克隆细胞中大量合成 D．单克隆抗体携带抗癌药物特异性地与癌细胞结合 5．只能使动物细胞融合的常用诱导方法（ 　） A．PEG　 B．灭活的病毒 C．电刺激 D．离心 6、“生物导弹”是指 （　 ） A.单克隆抗体 　　B.杂交瘤细胞 C.产生特定抗体的B淋巴细胞　　 D.在单克隆抗体上连接抗癌药物 过程： 抗原 小鼠 效应B细胞 骨髓瘤细胞 多种杂交瘤细胞 细胞融合、筛选 多孔培养板单个细胞培养，筛选 能产生特定抗体的细胞群 体外培养 体内培养 提取出单克隆抗体 小结：