动物细胞工程s（参考）.pptx

2.2 动物细胞工程动物细胞培养动物细胞核移植常用技术动物细胞融合生产单克隆抗体以动物细胞培养技术为基础。 １.动物细胞培养概念：动物细胞培养就是从动物机体中取出相关的组织，将它分散成单个细胞，然后放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和增殖。　Ｐ４４动物细胞生长和增殖的特性：贴壁生长动物细胞生长和增殖的特性：接触抑制单层细胞贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞就会停止分裂，这种现象称为接触抑制。P45但癌细胞会失去接触抑制形成多层细胞。剪碎胰蛋白酶处理细胞培养液胰蛋白酶洗脱、分瓶培养动物细胞培养过程取动物组织块胚胎或幼龄动物的组织细胞悬液原代培养传代培养传代培养50代细胞动物组织原代培养10代细胞保持细胞正常的二倍体核型部分细胞核型可能改变；增殖缓慢甚至停止发生突变，获得不死性(无限增殖细胞系)动物细胞培养的条件P46⑴无菌、无毒的环境：⑵营养： 糖、 氨基酸、 无机盐、微量元素、促生长因子； 动物血清、血浆⑶适宜温度、pH：⑷气体环境：灭菌、加抗生素，定期更换培养液36.5 ± 0.5℃； pH7.2～7.4用95%空气加5%CO2的培养箱培养动物细胞的保存：超低温（冷冻）动物细胞培养应用： ①理论研究：生理、病理、药理②生产有价值的蛋白质制品：如病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体③检测有毒物质④转基因动物细胞的培养动物细胞培养和植物组织培养的比较项目动物细胞培养植物组织培养相同点都需无菌条件；都进行有丝分裂不同点原理培养基目的细胞的增殖细胞的全能性液体培养基固体培养基动物血清、葡萄糖植物激素、蔗糖获得细胞或细胞产品获得植物体或细胞产品2. 动物体细胞核移植技术和克隆动物 动物核移植是将动物的一个细胞的细胞核，移入一个已经去掉细胞核的卵母细胞中，使其重组并发育成一个新的胚胎，这个新的胚胎最终发育为动物个体。用核移植的方法得到的动物称为克隆动物。胚胎细胞核移植体细胞核移植核移植供体10代以内的细胞供、受体细胞融合激活受体细胞体细胞核移植的过程：细胞培养供体动物 供体细胞胚胎培养细胞融合核注入重组细胞去核MⅡ期卵母细胞去核卵母细胞胚胎移植重组胚胎代孕母体克隆动物克隆动物过程中应用的现代生物技术： ①细胞培养② 核移植 ③细胞融合④胚胎培养⑤胚胎移植动物细胞核具有全能性克隆动物的原理：选择MⅡ中期卵母细胞的原因：核移植产生的克隆动物与供核亲本并非100%相同的原因：细胞质中含有与分裂、分化有关的物质，能使重组细胞发育为重组胚胎。细胞质基因来源于受体卵母细胞体细胞核移植技术的应用前景 P49⑴加速家畜遗传改良的进程核移植胚胎干细胞⑵保护濒危物种⑶生产医用蛋白质及组织器官的移植⑷了解胚胎发育和衰老过程；追踪研究疾病的发展过程和治疗疾病体细胞核移植技术存在的问题 P50⑴成功率非常低⑵技术环节有待改进⑶克隆动物存在健康问题⑷克隆动物食品安全性存在争议277次乳腺细胞核移植实验；获得29个发育为8细胞的“胚”；13头代孕母亲；三只羊羔出生，一只成活，即“多莉”。n.无性繁殖系v.无性繁殖 克隆(clone)从一个共同的祖先通过无性繁殖的方法繁殖出来的一群遗传特征相同的个体，也可用在细胞或分子水平。个体克隆： 不经过有性生殖，形成基因型完全相同的两个或更多的个体。细胞克隆： 由一个细胞不断分裂所形成的一大群细胞的基因型都相同。微生物克隆：由一个细菌繁殖成一个菌落。DNA分子克隆：由一个DNA分子复制产生多个子代DNA分子。3. 动物细胞融合与单克隆抗体概念：动物细胞融合也称细胞杂交，是指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程。 融合后形成的具有原来两个或多个细胞遗传信息的单核细胞称为杂交细胞。P52细胞融合技术突破了有性杂交的局限，使远缘杂交成为可能。动物细胞融合的原理：诱导动物细胞融合的方法：细胞膜的流动性①物理方法②化学方法③生物方法：灭活的病毒，如仙台病毒什么是单克隆抗体？多克隆抗体（抗血清） 获取方法：向动物体内反复注射某种抗原，使动物产生抗体，从血清中分离抗体。 特点：产量低、纯度低、特异性差，是多种抗体的混合物。 P52每一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体。单克隆抗体： 单个杂交瘤细胞增殖产生的细胞群分泌的高度纯一的抗体。 需要解决的问题：使单一的B淋巴细胞在体外连续增殖 1975年，米尔斯坦（C.Milstein）和科勒（G.K?hler）将B淋巴细胞与无限增殖的 骨髓瘤细胞融合，得到杂交瘤细胞。 杂交瘤细胞的特点： 既能产生专一抗体，又能大量增殖。P54特定抗原，多次免疫脾脏，多种，经免疫的B(效应B)单克隆抗体的制备融合的同种核细胞及未融合细胞多次抗体阳性筛选杂交瘤细胞体内培养杂交瘤细胞体外培养免疫小鼠骨髓瘤细胞经免疫的B淋巴细胞细胞融合多种细胞选择培养基筛选杂交瘤细胞抗原－抗体反应筛选能分泌专一抗体