动物细胞融合与单克隆抗体一轮复习（参考）.pptVIP

（一）概念 A细胞 B细胞 人工诱导 杂交细胞 动物细胞融合（也称细胞杂交）：是指两个或多个细胞融合形成一个细胞的过程。 融合后的细胞称作杂交细胞 一、动物细胞融合 细胞膜的流动性 原理？ 3、两两融合后细胞的类型？ 4、AB杂交细胞遗传物质有什么特点？ 三种AA、AB、BB、（A、B） 融合后的细胞进行有丝分裂，形成完整的杂交细胞 含两种生物的遗传物质 （二）动物细胞融合过程 A细胞 B细胞 1、诱导融合方法： 物理方法： 化学方法： 生物方法： 电激等 PEG 灭活病毒 2、为什么灭活的病毒能作诱导剂？ 灭活丧失感染能力 保留融合活性 （三）动物细胞融合技术的意义和应用 1、突破有性杂交方法的局限，使远缘杂交成为可能。 2、最主要用途：制备单克隆抗体。 （四）比较动、植物细胞杂交技术 比较项目 细胞融合原理 细胞融合过程 用途 诱导手段 植物体细胞杂交 动物细胞融合 细胞膜的流动性 细胞膜的流动性 酶解法去除细胞壁后诱导原生质体融合 用胰蛋白酶使细胞分散后诱导细胞融合 离心、电刺激、振动、聚乙二醇 克服远源杂交不亲和，获得杂种植株 除应用植物细胞杂交手段外，还有灭活病毒 获得杂种细胞、制备单克隆抗体 强调：效应B淋巴细胞是能够产生抗体的B淋巴细胞，下文将其简称为B淋巴细胞 抗体：能够与抗原发生特异性结合的免疫球蛋白。 二、单克隆抗体 效应B细胞 记忆B细胞 抗原 刺 激 抗体 产 生 能产生抗体的细胞是浆细胞（即效应B细胞）。 B淋巴细胞 分裂、分化 抗体的传统生产方法 抗原 反复注射动物 从动物的血清中分离抗体 该法制备抗体的缺点： 产量低、纯度低，且抗体的特异性差、灵敏度低。 单克隆抗体！ （一）单克隆抗体的概念： 单一的B细胞克隆产生的化学性质单一、特异性强的抗体 （二）单克隆抗体的制备 能否对浆细胞进行动物细胞培养，获得大量的浆细胞，从而获得单克隆抗体？ 如何让浆细胞无限增殖？ 效应B细胞 瘤细胞 融合 杂交瘤细胞 单克隆抗体 动物细胞培养 产生 既能无限增殖， 又能产生特异性抗体。 ①为什么给小鼠注射特定的抗原蛋白？ ② 会有几种融合方式？ ③ 杂交瘤细胞是如何筛选出来的？有何特点？ ④ 是否所有的杂交瘤细胞都能产生专一性抗体？ ⑤ 如何获得大量的单克隆抗体？ （一选）选择培养基：只有杂交瘤细胞才能存活 BB 、B瘤 、瘤瘤 （B、瘤） 获得产生相应抗体的B细胞 （二选）：选能产生专一抗体的杂交瘤细胞 √ 体外培养 小鼠腹腔内培养 杂交瘤细胞特点：既能产生特异性抗体，又能大量增殖。 克隆化培养 骨髓瘤细胞 抗原 B淋巴细胞 浆细胞 体外培养 体内培养 单克隆抗体 杂交瘤细胞 融合 筛选 产生特定抗体的杂交瘤细胞 克隆化培养 抗体检测 多次筛选 刺激 增殖 分化 单抗制备过程分哪几步？请用箭头把以下代表单克隆抗体制备过程步骤的图解的字母按正确顺序连接起来。顺序是？ （三）单克隆抗体的应用 1、诊断试剂——最广泛应用 准确、高效、简易、快速 单克隆抗体最主要的优点：特异性强，灵敏度高，可大量制备。 “生物导弹” ＝单克隆抗体＋药物 单抗导向，药物为弹头 2、治疗疾病和运载药物 主要用于治疗癌症治疗，单克隆抗体作为载体，运载抗癌药物，形成“生物导弹”，准确杀伤癌变细胞。 【例4】科学家用小鼠骨髓瘤细胞与某种细胞融合，得到杂交细胞，经培养可产生大量的单克隆抗体，与骨髓瘤细胞融合的是（ ） A.经过免疫的B淋巴细胞 C.经过免疫的T淋巴细胞 B.不经过免疫的T淋巴细胞 D.不经过免疫的B淋巴细胞 【例5】单克隆抗体是由下列哪种细胞产生的 （ 　） B淋巴细胞 　 B．T淋巴细胞 C．骨髓瘤细胞 D．杂交瘤细胞 A D 【例6】用动物细胞工程技术获取单克隆抗体，下列实验步骤中错误的是（ ） A．将抗原注入小鼠体内，获得能产生抗体的B淋巴细胞 B．用纤维素酶处理B淋巴细胞与小鼠骨髓瘤细胞 C．用聚乙二醇作诱导剂，促使能产生抗体的B淋巴细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合 D．筛选杂交细胞，并从中选出能产生所需抗体的细胞群，培养后提取单克隆抗体 B × 两个过程 动物细胞培养过程 单克隆抗体制备过程 三个“一” 一个诱导细胞融合的新方法 －－灭活病毒 一个新细胞－－杂交瘤细胞 一个优势－－单克隆抗体特异性 强、灵敏度高的优势 (1)若A细胞是小鼠骨髓瘤细胞，则B细胞是取自小鼠体内的 细胞，从小鼠体内提取分离该细胞之前，应给小鼠注射_____________类物质。