如何看抗体检测结果及检测应用（参考）.pptVIP

以人为本 以正兴邦 * 以人为本 以正兴邦 以人为本 以正兴邦 如何看抗体检测结果及抗体检测应用 隋海亮 2014年7月5日 文档密级：内部公开 一、猪瘟 ELISA原理 ——阻断（竞争）ELISA 抗体 抗原 加入样品 洗涤+酶标记物 洗涤+底物 蓝色 淡蓝色 终止读数 阻 断（竞争）ELISA 原理 例如：CSFV-Ab、PRV-gI、PRV-gB 猪瘟疫苗的免疫评估—关注两点 阳性率： 猪瘟抗体（阻断率（Blocking）≥40%，判为阳性结果；30%＜Blocking＜40%，判为可疑结果；Blocking≤30%，判为阴性结果）； 免疫合格率：阻断率（Blocking）≥50%的，即为免疫合格。免疫合格的比例即为免疫合格率。 变异系数： Coefficient of Variation (CV) 变异系数计算的是平均个体的变化，以平均滴度的背离的百分数来表示 公式如下 标准偏差（STDEV） CV= X 100% 平均阻断率 CV≤40%,显示了群内猪只有一个均衡的、相似反应 CV≥60%,显示了群内猪只滴度反应变化高于正常估计值 猪瘟检测的应用 免疫评估： 商品猪：猪瘟二免后4-6周 ，要求：阳性率 ≥80%,CV≤40% 种猪群（公猪和母猪）：猪瘟免疫后4-6周，要求 ：免疫合格率≥80%（严格一点，要≥90%）,CV≤40% 后备猪（全群检测）：进入隔离舍后1-2周、进入配种舍前1个月（6-6.5月龄），要求： Blocking ≥40%，阴性猪补打疫苗，3周后复检，不合格淘汰。 猪瘟检测的应用 仔猪首免日龄的确定： 选30-60头仔猪，日龄和体重相近，每窝1-2头，确认没有野毒感染的风险，不接种猪瘟疫苗 连续采血：出生后7天、14天、21天、28天、35天、42天检测抗体水平 要求：CSFAb Block≤30%仔猪占20%-40%时为首免日龄(依据感染压力和平均阻断率而定)。 二、蓝耳 ELISA原理 ——间接ELISA 抗体 抗原 加入样品 洗涤+酶标记物 洗涤+底物 蓝色 无色 终止 读数 间 接 ELISA 原理 结果判断 结果判定：蓝耳抗体（S/P≥0.4，判为阳性结果； S/P0.4，判为阴性结果） 免疫猪群 0.4＜S/P≤2.5；对于过高抗体种猪，隔离饲养，2周后采血检测，若抗体处于上升趋势的种猪则淘汰 非免疫猪群 S/P值≥0.4 淘汰或隔离饲养 应用 公猪 季度性监测全部公猪 ，一年4次 要求： S/P≥2.5公猪暂停使用(1-2个月)或PCR确认感染状态 母猪 季度性监测母猪 要求：S/P应主要在2.5 ≥ S/P ≥0.4(90%母猪抗体在免疫后转阳) 后备母猪和后备公猪 在引进种群前1个月，全群监测 要求：S/P≥2.5和S/P≤0.4暂停引入繁殖群 应用 动态检测 4周龄、10周龄猪群，每次20-30样本 主要是：分析蓝耳感染状态，判断猪群是否稳定，(对于不稳定群体,延迟转群或免疫等)，如果S/P≥2.5的比例超过5%，则判断该场蓝耳不稳定，有感染；没有则稳定。 三、伪狂犬 伪狂犬gE：结果成立条件：阴性对照平均值-阳性对照平均值必须大于或等于0.3；否则试验无效。 判定结果：如果S/N值低于或等于0.60，样品应判定为阳性；如果S/N值大于0.70，样品应判为阴性；处于0.6~0.7的样品判定为可疑，间隔两周时间可重新检测。 伪狂犬病毒 gE片段 gB片段 疫苗病毒片段 猪群PRV感染状况的普查 采样要求 公猪群：全部采样 生产母猪群：随机采样30个样本 15周龄后的生长猪（母源抗体消失）：随机采样20-30个样本 检测方法 IDEXX PRV gI ELISA S/N≤0.6 阳性，S/N＞0.7阴性0.6S/N≤0.7 隔离2周后重复检测 普查结果分析： 低感染群：种猪阳性率10%以下，可做净化 高感染群：种猪阳性率10%以上，低于30%，可做净化；高于30%，通过疫苗控制，来稳定猪群 伪狂犬疫苗的免疫评估—针对阴性场 商品猪群 免疫疫苗后4-6周，随机采样20-30份 要求：gE抗体检测全部为阴性； gB抗体检测阳性率≥95% 伪狂犬的评级标准： 伪狂犬gE抗体全阴性，则为阴性场 伪狂犬gE抗体阳性，但检测15周龄猪，gE抗体转阴，则为阳性稳定场 伪狂犬gE抗体阳性，但检测15周龄猪，gE抗体阳性率达到20%以上，则为阳性不稳定稳定场 应用—净化 母猪群,公猪群(全部) 过去6-12个月没有使用全病毒灭活苗或非gE基因缺失弱毒疫苗　 若S