发酵工程实验报告集要点.doc

生物技术大实验 实 验 报 告 集 班级 生物技术1212 学号 1220212206 姓名 宋扬 使用时间 2015.12.14 至 2015.12.19 组别 一 苏 州 科 技 学 院 化 学 与 生 物 工 程 学 院 实验室学生守则 一、严格遵守实验室各项规章制度和管理措施，服从教师及实验技术人员 的指导。 二、严格按照实验要求，做好实验预习,实验之前5分钟进入实验室，及时、 准确地完成实验任务，实事求是地完成实验报告，杜绝弄虚作假。 三、严格执行操作规定，爱护仪器设备及工具。凡不按教师的指导擅自操 作引起仪器、设备损坏者，应予赔偿。 四、爱护实验室公共财物，节约水电、材料和试剂。未经允许不得随便挪 动非实验需用的其他仪器，不得随便拆装仪器或将仪器、工具带至室 外。 五、持实验室的严肃安静，不得大声喧哗、嘻闹，严禁在实验室内抽烟和 吃东西。 六、严防事故，确保实验室安全，发现异常情况，应及时向有关教师和管 理人员报告。 七、每次实验结束后，主动整理好仪器设备，归还所借器材，关闭电源、 水源，按指导老师的要求做好实验结束工作及室内外的清洁卫生工作， 经指导老师许可后，方可离开。 苏州科技学院化学与生物工程学院 实 验 报 告 实验名称 辅酶Q10发酵过程工艺控制 组别 九 实验结果及实验分析与讨论： 摘要：通过辅酶Q10产生菌类球红细菌Rhodobacter sphaeroides的培养，学会菌种在小型发酵罐中培养的过程，包括培养基和设备的灭菌、种子的培养、接种、发酵工艺控制等，进一步巩固所学的有关发酵过程的控制、中间补料、溶氧控制、变温发酵及代谢调节等工艺，学会分析代谢曲线，掌握有关参数及辅酶Q10的定量分析方法。 关键词：辅酶Q10，补料发酵，葡萄糖量，溶氧测定 辅酶Q10（Coenzyme Q10），是一种位于线粒体上的脂溶性化合物，化学名称为2,3-二甲氧基-5-甲基-6-癸异戊烯基苯醌。辅酶Q10的制备方法有组织提取法、微生物发酵法和化学合成法。目前，我国国内多家公司均实现了辅酶Q10的工业化生产，多采用微生物发酵法，且据报道，最高产量已达到3000mg/L。葡萄糖是碳源中最易利用的糖,几乎所有的微生物都能利用葡萄糖,所以葡萄糖常作为培养基的一种主要成分,并且作为加速微生物生长的一种有效的糖。适量地增加葡萄浓度可以有效提高产物的合成量。因此，选择合适的葡萄糖补加方式并合理控制培养基中葡萄糖的浓度有利于产物的合成。 本试验采用类球红细菌Rhodobacter sphaeroides进行深层液体发酵生产辅酶Q10，发酵方式为流加分批发酵。通过流加补料将发酵过程中葡萄糖浓度分别控制在10g/L-15g/L,5g/L-10g/L,探究发酵过程中维持葡萄糖不同浓度对类球红细菌发酵生产辅酶Q10的影响。 一、实验的仪器和试剂 1、仪器 BIOTECH-7BG型发酵罐、高效液相色谱、显微镜、台式离心机、旋转蒸发仪等。 2、菌种 类球红细菌Rhodobacter sphaeroides 3、培养基 （1）种子培养基（g/L）：葡萄糖 3，酵母提取物 8，NaCl 2，KH2PO4 1.3，MgSO4·7H2O 0.25, 1mL 辅液 （2）发酵培养基(g/L) : 葡萄糖30,甘露醇7.5,玉米浆干粉3，鱼粉蛋白胨3，谷氨酸钠5, NaCl 3.5 硫酸铵 3，KH2PO4 3，MgSO4 ·7H2O 15 ,FeSO4 1.25,MnSO4 0.12,1mL 辅液；用NaOH调pH至 7.0（发酵罐培养基加3ml 泡敌） 辅液（g/L）：盐酸硫胺 1，生物素0.015，烟酸 1，CuSO4 0.1。 （3）补料培养基(g/L)：葡萄糖300 （4）发酵消泡剂配比（v）：泡敌∶水=1∶10。 （5）培养基灭菌方法：培养基等配好后在蒸汽灭菌罐内于115℃下灭菌30分钟。 二、实验的步骤 1、发酵工艺条件路线为 平板活化 → 菌种子斜面 → 摇瓶种子 →罐发酵。 2、斜面种子培养 从平板培养基上单菌落接种于斜面培养基上，32℃恒温培养3d。 3、摇瓶种子培养 250ml摇瓶加入50 ml 种子培养基，灭菌后冷却，挖一约0.5cm2小块斜面放入培养基中，30℃，200r/min，培养24h。 4、发酵 （1）罐发酵培养 以8%（v/v）接种量接种于5L（装液3L）发酵培养基中，32℃，pH6.8±0.2，0.03Mpa，3L/min（初始）,200 r/min（初始），补料分批培养，用氨水自