HPLC原理与应用讲解.ppt

高效液相色谱法 化学化工学院 1.HPLC仪器结构及原理 3.操作条件的选择—流动相的选择 流动相要求： (1)溶剂应当是高纯度，溶剂与固定相不互溶，并能保持色谱柱的稳定性； (2)溶剂的性能与使用的检测器应当匹配；选用检测器波长比溶剂的紫外截止波长要长，甲醇：205nm; 乙腈：190nm (3)溶剂对样品应有足够的溶解能力； (4)溶剂应具有低的粘度和适当低的沸点； (5)尽量避免使用具有显著毒性的溶剂。 常用流动相溶剂： 洗脱方式—等度洗脱、梯度洗脱 等度洗脱： 整个洗脱过程中，流动相的组成比保持不变 梯度洗脱： 在一个分析周期中，按照一定的时间程序连续或阶段性的改变流动相的组成比，从而改变溶剂的极性、离子强度、pH值等，使每个组分在适宜的条件下获得分离。 梯度洗脱优点： 改善峰型；提高柱效；减少分析时间；使强滞留组分不容易残留在柱子。 梯度洗脱装置 4.HPLC在各领域的主要应用 1.环境:多环芳烃、多氯联苯、硝基化合物、酚类化合物、邻苯二甲酸脂等。 2.食品:食品营养成分分析、食品添加剂分析、食品污染物分析。 3.医药:合成药物：抗生素、抗忧郁药物、黄胺类药等；天然药物：鉴别中药真伪或者产地、吲哚碱、鸦片碱、强心甙测定等。 4.农药:有机农药、除草剂等。 5.化工:无机化工产品、合成高分子化合物、表面活性剂、洗涤剂成分、化妆品、染料等。 1.环境保护——多环芳烃标准品色谱图 1.环境保护——苯及其衍生的分离谱图 2.食品分析中的应用—食品营养成分分析 啤酒中的有机酸分析 2.食品分析中的应用—食品添加剂分析 3.医药中的应用—抗生素的测定 3.医药中的应用—复方丹参片中丹参酮ⅡA的测定 3.医药中的应用—中药白鲜皮的指纹图谱 不同地区的白鲜皮指纹图谱考察 4.化工中的应用—24种禁用偶氮染料色谱图 4. HPLC发展前景 固定相的发展 前处理方法 检测器的发展 联用技术的发明与应用 4. HPLC发展前景—固定相的发展 高纯硅胶基质固定相 化学键合的种类 按键合官能团的极性分：极性和非极性键合。 极性键合相：氰基(-CN)、氨基(-NH2)和二醇基(DIOL)键合相。 非极性键合相：各种烷基(C1～C18)和苯基、苯甲基等，以C18应用最广。 聚合物基质固定相 优点： 色谱选择性好 样品容量较大 化学稳定性好 不易产生非特异性吸附 不足： 刚性不理想、孔结构复杂、溶胀或收缩 多孔石墨化碳固定相 特点： 稳定性好-在低或高pH条件下抑制酸碱离子 极性样品具有较强的保留 异构体选择性提高 可分离旋光异构体 可进行族分离 流动相组成简单 氧化钴基质固定相 优点： 稳定性好 强碱分析速度快 高温快速分析  优点： 高比例水流动相，不会导致烷基链收缩 极性化合物(包括酸和碱性化合物)保留增强 传统C18／C8固定相选择性不同 可用低浓度缓冲溶液作流动相，以及固定相官能团低流失，适合于LC/MS 包埋极性基团键合相作用机理 氟烷基键合固定相 特点： 在与 C18/C8 相似的流动相条件下，选择性改善 卤代化合物和芳香异构体的保留更强 分离含羟基、羧基、硝基和其它极性基团化合物具有显著优势 4. HPLC发展前景—样品前处理方法 固相萃取 优点：同步实现富集和纯化 应用范围： 水中有机污染物的痕量富集、水中半挥发性有机物的测定及大气和土壤样品的前处理 4. HPLC发展前景—样品前处理方法 分散液液微萃取 特点： 有机溶剂用量少，富集倍数高 应用范围： 适用于水溶液中有机物的提取，如有机磷农药、酚类物质等。也可用于水溶液中重金属( 钯 钴 铅 钒 有机锡等)的萃取。 4. HPLC发展前景—样品前处理方法 固相微萃取： 在固相萃取基础上发展起来，采用一根聚合物涂层的熔融石英纤维，从样品基质中或样品上方的顶空气体中直接吸附萃取待测物，然后再色谱进样口解吸、分析。 优点： 所需样本量少,避免了乳化现象,回收率高， 重现性好,而且便于自动化操作。 4. HPLC发展前景—样品前处理方法 超临界流体萃取： 利用超临界流体的溶解能力与超临界流体具有与流体相近的密度和与气体相近的豁度，扩散系数为液体的10倍至100倍，对很多物质有较好的渗透性和较强的溶解能力。 优点： 提取过程快速、简便，消除有机溶剂对人体和环境的危害，并可与许多分析仪器联用。 4. HPLC发展前景—样品前处理方法 微波辅助萃取： 在微波中，由于吸收微波能力的差异使基体物质的某些区域或萃取习题的某些组分被选择性的加热，从而使样品中要分析的组分从样品基质中渗出，实现与基质的分离。 优点： 受溶剂亲和力影响小，设备简单，适用范围广，重现性好，节省时间和溶剂。 4.