无名字-微波辅助提取.docx

微波辅助提取-高效液相色谱法测定蔬果中Vc含量摘要 本实验先采用微波辅助萃取法快速萃取柠檬中的Vc，以1mol/L乙酸为萃取剂，再采用高效液相色谱进行定性定量分析，以3%的乙腈-0.05mol/L KH2PO4水溶液作为流动相。通过对比停留时间进行定性分析，通过计算峰面积以及制作校准曲线进行定量分析。校准曲线在Vc浓度在5-100mg/L范围内与色谱峰面积呈良好的线性关系，相关系数为0.9991。结果测得柠檬中Vc的含量为42.52mg/100g。本实验方法具有用样少、分析快、操作简单、准确度高等特点。关键词 微波提取 高效液相色谱 维生素C 柠檬1 引言 维生素C（Vitamin C, Vc）又叫抗坏血酸，是一种水溶性维生素。Vc在体内参与多种反应，如氧化还原过程，在生物氧化和还原作用以及细胞呼吸中起重要作用。人体内缺乏Vc时容易导致坏血病。同时，由于Vc是一种水溶性的强有力抗氧化剂并参与胶原蛋白的合成，它同时还具有防癌、预防动脉硬化、治疗贫血、抗氧化和提高人体免疫力等功效。Vc在蔬果中普遍存在，尤其是柑桔类水果中含量较高。樱桃、番石榴、辣椒、猕猴桃等水果中Vc含量在50-300 mg/100 g。 微波辅助提取利用与极性物质的热效应及非热效应来提高提取效率，且以水或醇为溶剂，对环境无污染。[1]测定 Vc常用的方法有靛酚滴定法，分光光度法及高效液相色谱法等。靛酚滴定法测定的是还原型抗坏血酸，反应终点为粉红色，但如果果蔬的汁液为红色则会产生干扰，滴定终点不易判断。[2]而分光光度法操作费时[3]，高效液相色谱法是目前发展较快的一种检测方法，其具有高效、快速、稳定、可靠等特点。微波辅助萃取具有快速高效、操作简便、节省溶剂等优点，在天然产物、环境、食品等领域中得到广泛应用。本实验采用微波辅助萃取法快速萃取蔬果中的Vc，采用高效液相色谱进行分析，以Vc标准系列溶液的色谱峰面积对其浓度做校准曲线，根据样品中Vc的峰面积，由校准曲线计算其浓度。本实验方法具有用样少、分析快、操作简单、准确度高等特点。2 实验部分2.1 仪器试剂2.1.1 仪器高效液相色谱仪：LC-20AT；微波萃取仪（上海新仪微波化学科技有限公司）；色谱柱：依利特或PhenomenexC18柱(250mm×4.6mm，I.D.5μm)。2.1.2 试剂乙腈（色谱纯），冰乙酸，维生素C，磷酸二氢钾等均为分析纯；小西红柿、桔子或西红柿样品。实验用水为超纯水。Vc标准溶液：快速准确称取0.025g Vc，用1mol/L乙酸溶液溶解，定量转移至250mL容量瓶中，用1mol/L乙酸溶液定容，得到100mg/L标准溶液备用，现用现配。2.1.3 色谱条件流动相：3%的乙腈-0.05mol/LKH2PO4水溶液（v/v）；流速1mL/min；柱温为室温，紫外检测波长265nm；进样量10μL。2.2 实验步骤2.2.1 按操作说明开启液相色谱仪，设定方法参数。2.2.2 校准曲线绘制：分别配制 5，20，50，80，100 mg/L 的 Vc 样品溶液，待液相色谱稳定后进样分析。以Vc 色谱峰面积对浓度作图，绘制校准曲线。2.2.3 样品准备：准确称取柠檬果肉5.0130g，以1 mol/L乙酸50 mL 为萃取溶剂，微波功率设为600W，萃取时间为5min，萃取温度设定为50℃，平行萃取两次。萃取液过滤后用1 mol/L乙酸溶液定容至100mL，制成供试品溶液。2.2.4 定性分析：分别取10μL 50 mg/L的Vc 标准溶液和供试品溶液，进HPLC 分析。根据保留时间定性分析蔬果中的Vc。2.2.5 定量分析：供试品溶液经 0.45 μm微孔滤膜过滤后进行 HPLC 分析。平行测定2次，记录其Vc 的色谱峰面积，根据校准曲线计算蔬果样品中Vc 的含量，结果以 mg/100g表示。3. 实验结果与讨论3.1 实验结果3.1.1 校准曲线的绘制表1 标准溶液的浓度及对应的峰面积浓度c/mg·L留时间t/min2.7542.7532.7722.7722.778峰面积A118931548268155133924711593209195根据峰面积对浓度描点，曲线拟合后得到以下校准曲线。峰面积 图1　Vc峰面积-浓度校准曲线所得校准曲线方程为：峰面积A=32420c/mg·L-1-73652，相关系数R2=0.9991。3.1.2 样品色谱图3.1.2 数据处理根据峰面积A=32420c/mg·L-1-73652，代入样品中Vc色谱峰的峰面积，求出检测液浓度；转换成各种水果中Vc的含量如下表所示：表2 各种样品的色谱数据样品样品质量m/g保留时间t/min峰面积Vc浓度c/mg·L-1*1Vc含量mg/100gMeat15.00372.926586