土壤微生物.docx

鲍士旦.土壤农化分析(第三版)7M〕.北京:农业出版社.2000一微生物量测定1 土壤最大田间持水量的测定称取各处理新鲜土样100g,于105℃下烘干8h,测得干重为W1；用14cmX15cm底部有孔的花盆,盆底部铺一层滤纸,测得花盆和滤纸的总重量为W2,每盆加入100g新鲜土样,每盆先加入一定量的水,使土壤中的水分达到饱和状态,静止2h后,再等量加入水,如此重复数次,直到土壤表面无积水,且花盆底部不积水为止,这时称取相应花盆和土壤的总重量为W3,每处理设3个重复。根据下式计算100g新鲜土壤最大田间持水量(中国土壤学会,1999)。土壤最大田间持水量/100g=W3-W2-W12 土壤预处理 将供试土壤水分含量调至最大田间持水量的40%，然后将土壤置于直径X高=14cmx17cm塑料桶内，内放两个50mL小烧杯，一个盛30mL蒸馏水，另一个盛30mLI%NaOH溶液，以保持桶内的湿度和吸收释放的CO2，塑料薄膜密封，于25℃恒温培养室内黑暗条件下培养一周(中国土壤学会，1999)。3 土壤样品熏蒸称取相当于25g烘干土重的湿土，放入100mL的小烧杯中，连同盛有5OmL左右无乙醇氯仿的小烧杯(里面放入少量碎瓷片，防止暴沸)，一起放入真空干燥器内，真空干燥器底部加入少量水和稀碱(lmolL/NaOH)。抽真空，使氯仿沸腾，并持续2min以上，关闭真空干燥器的阀门，然后将真空干燥器放入25℃暗室中，保持24h。取出氯仿(倒回瓶中重复使用)，除尽干燥器底部的碱，再用真空泵反复抽气3-5次，每次3min以上，直到土壤闻不到氯仿味为止。(中国土壤学会，1999)。称取等量的土壤,置于另一干燥器中为对照试验4 土壤微生物碳的测定采用灭菌---提取法。从干燥器中取出土样，放入15OmL三角瓶中，加入0.5mol/LK2SO4溶液(1：4土水比)，振荡30min(25℃，200r/min)后迅速用中速滤纸过滤，滤液立即测定或在-15℃下保存。吸取10mL浸提液于15OmL消煮管(直径24mm，长295mm)，加入10mL0.018mol/LK2Cr2O7-H2SO4溶液(H2SO4浓度为12mol/L)，放入少量石英沙，摇匀后置于175士1℃的磷酸浴中煮沸10min，冷却后将溶液转移到150mL的三角瓶中，使总体积约为80mL，加一滴邻啡罗琳指示剂，用0.05mol/LFeSO4溶液滴定至终点。(中国土壤学会，1999；林启美等，1999)。土样碳含量=(V样品消耗硫酸亚铁—V空白消耗硫酸亚铁)xC硫酸亚铁浓度X3X5/(鲜土重X土壤含水量)土壤微生物碳(mg/kg)=Ec/kECEc--熏蒸与未熏蒸土壤中有机碳的差值， KEC--氯仿熏蒸杀死的微生物体中的碳被浸提出来的比例，取0.38。5 土壤微生物氮的测定采用Ross提出的方法(Ross，1992)。取20mL K2SO4提取液于开氏消煮管中，加入5mL浓H2SO4，沸水浴中加热至溶液减少一半，冷却，加入2g混合催化剂(K2SO4100：CaSO410：Se1)，在开氏消煮炉上缓慢加热(150℃)约2h直至消煮管中的水分全部蒸发掉，然后高温(硫酸发烟)消煮约3h至消煮液完全澄清，再次冷却，将消煮管接到开氏定氮仪上同土壤全氮进行蒸馏，然后用0.0051mol/L标准酸(HCL)溶液滴定硼酸吸收液(中国土壤学会，1999)。土样氮含量=(V样品消耗的盐酸-V空白消耗盐酸) xC 盐酸浓度X14X10/ (鲜土重x土壤含水量)土壤微生物氮(mg/g)=EN/KENEN--熏蒸与未熏蒸土壤中所浸提的全氮的差值 (mg/kg)；KNE--氯仿熏蒸杀死的微生物体中的氮被浸提出来的比例，取0.45。二 菌的分析：细菌、真菌、放线菌土壤微生物培养法准确称取待测样品10g，放入装有100ml无菌水并放有小玻璃珠的250mL三角瓶中，用手或置摇床上振荡20min，使微生物细胞分散，静置约20-30s，即成10-1稀释液；再用1ml无菌吸管，吸取10-1稀释液1ml移入装有9ml无菌水的试管中，吹吸3次，让菌液混合均匀，也尽量洗下粘在瓶壁上的菌落，减少误差，此即成10-2稀释液；再换一支无菌吸管吸取10-2菌液1ml移入装有9ml无菌水试管中，即成10-3稀释液；以此类推，一定要每次更换吸管，连续稀释，制成10-4、10-5、10-6、10-7、10-8等一系列稀释度的菌液，供平板接种使用。对于土壤中不同类的微生物通常采用不同的稀释度，使每个平皿中的菌落数以30-300个菌落为宜：真菌为10-1- 10-5，放线菌为10-3-10-5，细菌为10-4-10-6，固氮菌为10-4-10-6。每个稀释度均做3次重复。1 细菌的鉴定及数量的测定在感量天平上用称量纸称取牛肉膏3g，蛋白胨5g，琼脂15g。将牛肉膏