生化实验技术综合设计性大实验.pptVIP

合作性学习实验实施流程及要求 课堂理论学习：辅导相关生化大分子提取分离纯化基本知识 项目发布：了解项目内容 网上预约：理论自学——设计实验方案——网上递交——教师修改及审核——实验室项目实施——论文上交——教师批阅——评分 实验分组：各自组合，最多不超过4人/组，推选组长，负责平时讨论、项目方案设计及材料收集 实验实施要求：平时按各组计划时间分别进行实验，组长有义务指导下组相关实验内容，每次实验必须登记。 全班交流：实验结束安排课堂讨论交流，每组准备一人汇报，一人记录；要求用PPT总结汇报项目实施、实验创新、疑难点，其他组学生质疑，教师点评。 指导教师：汪财生、斯越秀 通过综合训练，能够系统掌握蛋白质、DNA制备的基本原理和操作，学习如何进行实验设计，掌握实验过程中的关键环节，对实验中出现的问题进行科学的分析；在学习实验技术的同时，自觉培养分析问题和解决问题能力。 7.干燥离子交换剂应如何进行处理？何谓离子交换剂转型？ 8.动植物总DNA或RNA提取的方法主要有哪些？以猪脾脏DNA提取为例试述每步骤主要原理是什么？如何判断所提取DNA的纯度？ 9.蛋白质浓度测定方法有哪些？如何鉴定所提取蛋白的纯度？未知蛋白质分子量测定方法有哪些？ 07级生物技术实验安排 11-14周 生物技术072-073班实验 14-16周 生物技术071班实验 15周 生物技术072-073班上交 论文及讨论材料等 17周 生物技术071班上交论文 及讨论材料等 第一部分 不同的生物体或同一生物体不同的组织，其破碎的难易不一样，使用的方法也不完全相同。动物的脏器组织，常用绞肉机机械法粉碎；植物肉质组织可以磨碎；许多微生物均具有坚韧的细胞壁，常用自溶、冷热交替、加砂研磨、超声波、加压处理等破碎方法。 如果提取的有效成分是体液或细菌胞外某些多肽激素、酶等，则不需要破碎细胞。 第二部分 免疫球蛋白(immunoglobulin,Ig）是人体接受抗原刺激后，由浆细胞所产生的一类具有免疫功能的球状蛋白质，是直接参与免疫反应的抗体蛋白的总称。各种免疫球蛋白能特异地与相应的抗原结合形成抗原-抗体复合物（免疫复合物），从而阻断抗原对人体的有害作用，对细菌等抗原的杀伤最后由补体去完成。 γ-球蛋白也称为丙种球蛋白，相对分子量为15-16万，沉降系数为7S；是一组在结构与功能上有密切关系蛋白质。杨据Ig的免疫化学特性，可分为五大类：IgG、 IgA、 IgM、 IgD、 IgE，其分子不论哪一类，都由四链组成，即由两条相同的长多肽链称H链（又称重链）及两条相同的短肽链称L链（又称轻链）组成。 机体大部分免疫功能力都依赖于IgG类免疫球蛋白，它约占免疫球蛋白总量的70-90%。 IgG是人和动物血浆蛋白的重要组分之一，制备γ-球蛋白的原料通常用动物血液，其次还有动物胎盘和初乳乳清。制备方法有低温乙醇法、利凡诺法、盐析法、离子交换法等。 2.1.4 核酸的理化性质 RNA和核苷酸的纯品都呈白色粉末或结晶，DNA则为白色类似石棉样的纤维状物。除肌苷酸、鸟苷酸具有鲜味外，核酸和核苷酸大都呈酸味。 DNA、RNA和核苷酸都是极性化合物，一般都溶于水，不溶于乙醇、氯仿等有机溶剂，它们的钠盐比游离酸易溶于水，RNA钠盐在水中溶解度可达40g/L。DNA在水中为10g/L，呈黏性胶体溶液。酸性溶液中，DNA、RNA易水解，中性或弱碱性溶液中较稳定。 天然状态的DNA 是以脱氧核糖核蛋白(DNP)形式存在于细胞核中。要从细胞中提取DNA 时，先把DNP抽提出来，再把P除去，再除去细胞中的糖，RNA 及无机离子等，从中分离DNA 。 DNP和RNP在盐溶液中的溶解度受盐浓度的影响而不同。DNP在低浓度盐溶液中，几乎不溶解，如在0.14 mol/L的氯化钠溶解度最低，仅为在水中溶解度的1%，随着盐浓度的增加溶解度也增加，至1mol/L氯化钠中的溶解度很大，比纯水高2倍。 RNP在盐溶液中的溶解度受盐浓度的影响较小，在0.14mol/L氯化钠中溶解度较大。因此，在提取时，常用此法分离这两种核蛋白。 2.1.5 细胞的破碎 细菌有坚硬的细胞壁，首先要破碎细胞。 方法有三种： ①机械方法：超声波处理法、研磨法、 匀浆法； ②化学试剂法：用SDS处理细胞； ③酶解法：加入溶菌酶或蜗牛酶，都可 使细胞壁破碎。 由于高等动物DNA 主要存在于细胞核与线