基因工程复习资料.docx

基因工程名词解释：第一章 基因工程概论1、基因工程：是利用DNA体外重组或PCR扩增技术从某种生物基因组中分离感兴趣的基因，或是用人工合成的方法获取基因，然后经过一系列切割，加工修饰，经连接反应形成重组DNA分子，再将其转入适当的受体细胞（转化），以期获得基因表达的过程。第二章 分子克隆工具酶 1、限制性内切酶：指一类能识别双链DNA分子中特定核苷酸序列，并在识别序列内或附近特异切割双链DNA的核酸内切酶。2、粘性末端：粘性末端是指DNA分子在限制酶的作用之下形成的具有互补碱基的单链延伸末端结构。3、同尾酶：许多不同的限制酶切割 DNA 产生的末端是相同的，且是对称的，即它们可产生相同的粘性突出末端。4、星号活性：非特异性切割在极端非标准条件下，限制酶能切割与识别序列相似的序列，这个改变的特殊性称星星活性。5、DNA连接酶：可使一段DNA的3′羟基末端和5′磷酸末端形成3′，5′- 磷酸二酯键，把两个DNA片段连在一起，封闭DNA双链上形成的切口的酶。6、Klenow DNA 聚合酶：大肠杆菌DNA聚合酶I经蛋白酶裂解而从全酶中除去具5′→3′外切酶活性的肽段，也称Klenow 片段。它具有5′→3′的DNA聚合酶活性，和很弱的3′→5′的外切核酸酶活性。第三章 分子克隆载体1、载体：将外源DNA或基因携带入宿主细胞并能自我复制的工具称为载体2、质粒：质粒是细菌细胞内携带的染色体外的能独立进行复制的环状DNA分子3、噬菌粒：带有丝状噬菌体大间隔区的质粒载体，是集质粒和丝状噬菌体的有利特征于一体的载体，具有ColE1复制起点及抗生素抗性选择标记，以及丝状噬菌体的间隔区4、科斯质粒（柯斯质粒，cosmid, cos site–carring plasmid)：人工构建的含有λDNA的cos序列（含两侧与包装有关的序列）的质粒载体第四章 人工染色体载体1、人工染色体载体：利用染色体的复制元件来驱动外源DNA片段复制的载体。2、酵母人工染色体载体：就是模拟酵母菌染色体的复制而构建的载体，是第一个可保持为线性分子的载体，从而模拟了染色体。这样的载体称为酵母人工染色体 。当装载外源DNA片段后，在酵母菌中可像酵母的染色体一样复制，从而达到克隆大片段DNA的目的。 3、BAC载体：细菌人工染色体是基于大肠杆菌的F质粒构建的高容量低拷贝质粒载体。第五章 表达载体1、表达载体（Expression vectors）：就是在克隆载体基本骨架的基础上增加表达元件（如启动子、RBS、终止子等），是目的基因能够表达的载体。（是用于表达原核或真核细胞中某个特定基因所编码的蛋白质产物的载体，其克隆位点的上游含有强启动子、下游含有转录终止序列，适用于表达某特定蛋白质。）2、融合蛋白：即编码原核多肽DNA序列与编码真核多肽cDNA（目的片段）融合成一体后表达出来的一种蛋白。N端由原核DNA序列编码，C端由真核基因完整序列cDNA编码。 3、穿梭载体（Shuttle vector）：是能够在两类不同宿主中复制、增殖和选择的载体。如有些载体既能在原核细胞中复制又能在真核细胞中复制，或能在 E.coli 中复制又能在革兰氏阳性细菌中复制。这类载体主要是质粒载体。第六章 基因工程中大分子的分离与检测1、分子杂交：有一定同源性的两条核酸单链，在适宜的温度和离子浓度等条件下，通过碱基互补退火形成稳定的双链分子的过程 。是在分子克隆中的一类核酸和蛋白质分析方法，用于检测混合样品中特定核酸分子或蛋白质分子是否存在，以及其分子量大小。2、印迹（bloting）：将DNA、RNA或蛋白质固定到固体支持物上的过程。根据其固定物分为 Southern bloting (DNA)、Northern bloting (RNA)和 Western bloting (蛋白质)。Southern bloting即目标 DNA 经过限制性酶切并通过琼脂糖凝胶电泳以后，碱性条件下变性处理，并保持DNA为单链，然后通过毛细管渗吸或电转移或真空转移的方式，将凝胶上的 DNA 转移到硝酸纤维素滤膜或尼龙膜上，然后与探针杂交。被检对象为DNA，探针为DNA或RNA。Northern blotting是指DNA-RNA分子杂交，应用特异性基因探针分析基因的转录水平，检测RNA（主要是mRNA）的方法。主要用来检测细胞或组织样品中是否存在与探针同源的 mRNA 分子，从而判断在转录水平上某基因是否表达，在有合适对照的情况下，通过杂交信号的强弱可比较基因表达的强弱。Western blotting将蛋白质样品从 SDS凝胶通过电转移方式转移到滤膜的方法3、原位杂交：就是将细菌菌落影印到滤膜上，或将菌种点种在滤膜上然后再生长出可见的菌落，对滤膜上的菌体进行原位裂解使 DNA 释放出来，并使之固定在滤膜上。然后