基因工程的基本操作程序.doc

基因工程的基本操作程序 目标的获取 从基因文库，PCR扩增，人工合成 载体构建 目的基因启动子终止子和标记基因 目标导入 目的基因进入受体细胞内 检测鉴定 基因探针法，生物学水平鉴定等 1 ??人工合成 ??技术比较 2 ??组成 ??功能 ??步骤 3 ??转化 ??受体种类 ??导入方法 4 1目标获取编辑 从基因文库中获取基因文库：将含有某种生物不同基因的许多DNA片段，导入受体菌的群体储存，各个受体菌分别含有这种生物的不同的基因，称为基因文库。 基因文库的种类：1、基因组文库；2、部分基因文库。 利用PCR技术扩增目的基因 PCR含义：是一项在生物体外复制特定DNA片段的核糖合成技术。全称是多聚酶链式反应。 PCR原理：DNA双链复制。 前提条件：有一段已知目的基因的核苷酸序列，以便根据这一序列合成引物。 扩增过程：目的基因DNA受热变性后解链为单链，引物与单链相应互补序列结合，在DNA聚合酶的作用下进行延伸，如此重复循环多次。 结果：每次循环后的目的基因的量增加一倍，即成指数形式扩增。 如果基因较小，核苷酸序列又已知，可以通过DNA合成仪用化学方法直接人工合成。 　 DNA复制 PCR技术 基因克隆 场所 细胞核 生物体外 细胞内 酶 解旋酶、DNA聚合酶 Taq酶 限制酶、连接酶 载体 不需要 不需要 需要 遵循原则 碱基互补配对 碱基互补配对 碱基互补配对 结果 DNA分子 DNA分子片段 DNA分子片段 编辑 组成 1、目的基因；2、启动子；3、终止子；4、标记基因。 1、使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传给下一代；2、使目的基因能够表达和发挥作用。 ⑴、用一定的限制酶切割质粒，使之出现一个黏性末端切口。、用同种限制酶切割目的基因，产生相同的黏性末端。 、将目的基因片段插入质粒切口，加入适量DNA连接酶，使目的基因与质粒形成重组质粒。 、基因表达载体的构成：目的基因+启动子+终止子+标记基因 编辑 转化 目的基因进入受体细胞内，并且在受体细胞内维持稳定和表达的过程。 ⑴、微生物：细菌细胞、植物细胞：卵细胞、受精卵、体细胞 、动物细胞：受精卵、胚胎细胞 ⑴、微生物：感受态细胞法、感受态细胞：指细菌细胞经过Ca2+处理后，细胞壁透性增强，能够吸收周围环境中DNA分子的生理状态。 、过程：CaCl2+处理细胞 → 感受态细胞 → 表达载体与感受态细胞混合 → 感受态细胞吸收DNA分子。 、植物细胞：农杆菌转化法、基因枪法、花粉管通道法 、农杆菌：土壤微生物，易感染双子叶植物和裸子植物；对大多数单子叶植物没有感染力。 、Ti质粒的T_DNA可转移到受体细胞，并整合到受体细胞染色体DNA上。 、过程：目的基因插入T_DNA，T_DNA进入农杆菌，将农杆菌导入植物细胞。 、动物细胞：显微注射法 、目的基因表达载体经过提纯备用，取得受体动物的卵（或受精卵）备用。 、采用显微注射技术将目的基因表达载体注射到卵（或受精卵）中。 、培养液培养成为早期胚胎。 、将早期胚胎移植到雌性动物子宫内，发育成新个体。 编辑 ⑴、检测：、导入检测：检测受体细胞染色体DNA上是否含有目的基因。 DNA分子杂交法（DNA探针法）。 、表达检测：检测目的基因是否完成转录出mRNA。 分子杂交法检测RNA。 检测目的基因是否完成表达翻译成蛋白质。 提取蛋白质，用相应的抗体进行抗原——抗体杂交。 、鉴定：个体生物学水平鉴定，鉴定抗性等。课时达标训练(二)　基因工程的基本操作程序 (时间：25分钟；满分：50分)一、选择题(每小题2分共20分)下列不属于获取目的基因方法的是(　　)利用DNA连接酶复制目的基因利用DNA聚合酶复制目的基因从基因文库中D．利用PCR技术扩增目的基因在基因工程的操作过程中获得重组质粒不需要(　　)连接酶　②同一种限制酶　③RNA聚合酶具有标记基因的质粒　⑤目的基因　四种脱氧核苷酸　　　B．②④下列关于目的基因导入受体细胞的描述不正确的是(　　)基因枪法导入植物体细胞的方法比较经济有效显微注射技术大肠杆菌最常用的转化方法是：使细胞的生理状态发生改变农杆菌转化法是将目的基因导入植物细胞最常用的方法下列技术依据DNA分子杂交原理的是(　　)观察DNA在细胞中的分布检测目的基因是否导入细胞检测目的基因是否完全转录并翻译检测目的基因是否进行转录如图为表达载体的模式图若结构X是表达载体所必需的X最可能是(　　) A．氨苄青霉素抗性基因启动子限制酶连接酶基因工程利用某目的基因(图甲)和P1噬菌体载体(图乙)构建重组DNA。限制性核酸内切酶的酶切位点分别是、和。下列分析错误的是(　　) A．构建重组DNA时可用和切割目的基因和P1噬菌体载体构建重组DNA时可用和切割目的基因和P1噬菌体载体图乙中的P1噬菌体载体只