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植物组织培养复习资料（开卷考试） 第一章 导论 【本章知识点】1.组织培养的含义 2.组织培养的理论基础（细胞全能性） 3.植物组织培养的类型及特点 4.植物组培在农业生产上的应用 一．组织培养的含义：用无菌的方法使植物离体器官、组织和细胞在人为提供的条件下生长和发育的所有的培养技术的总称，也称为离体培养或试管培养。 二、植物组培的理论基础 1、植物细胞全能性：植物体的每一个具有完整细胞核的细胞都具有该物种全部的遗传物质，在一定条件下具有发育成完整植物体的潜在能力。 2、细胞分化：导致细胞形成不同结构、引起功能改变或者潜在发育方式改变的过程。 3、脱分化：将以分化的不分裂的静止细胞放在培养基上培养，细胞重新进入分裂状态。一个成熟的细胞转化为分生状态的过程成为脱分化。（形成愈伤组织） 4、再分化：经脱分化形成的愈伤组织在一定培养条件下可转化为不同的细胞类型，形成完整植株的过程。 5、外植体：由活体植物上切去下来的，用于植物组织培养的各种接种材料。包括各种器官、组织、细胞和原生质体等。 6、愈伤组织：外植体离体培养下经脱分化产生的无特定结构和功能的薄壁细胞。 三、组织培养的类型及特点 【类型】 按培养材料分：愈伤组织培养、器官培养、细胞培养、原生质体培养等 按培养器官分：叶培养、跟培养、花药培养等 按培养成分分：固体培养、液体培养（也叫液体震荡培养） 按是否有需要光分：光培养、暗培养 按培养方法分：平板培养、微室培养、悬浮培养等 按培养过程分：初代培养（外植体的最初培养）、继代培养（培养物在培养基上生长一段时间以后由于营养物枯竭，水分散失及代谢产物的积累，必须转移到新鲜的培养基上培养，这种反复多次移植的组织培养称为继代培养） 【特点】 培养条件人为可控 培养生长周期短，繁殖效率高 管理方便，便于工厂化生产和自动化控制 四、植物组培在农业生产上的应用 1．用于种苗的快速无性繁殖 2．用于种苗的脱毒（EG马铃薯） 3. 用于某些植物的远缘杂交 4.用于突变育种 5.用于单配体育种 6.种质保存 7.基因工程 8．植物性药物和生物制品的生产 第二章植物组培实验室的构建和基本操作技术 【本章知识点】 1.植物组培实验室结构设计及主要实验设备 2.常用培养基MS、B5、White、N6、KM-8P等 3.母液的配制方法 4.培养基成分及其配制、分装和高压灭菌过程 5.有关灭菌、接种、培养、驯化和移栽的相关技术 6.接种的无菌操作程序要点 7.试管苗的特点及其不能成活的原因 8.试管苗的驯化和移栽应注意的问题 一、植物组培实验室构建和主要实验设备 【实验室构建】 【仪器设备与用具】 仪器设备与器皿用具：超净工作台、空调、除湿机或加湿机、恒温培养箱、高压灭菌锅、冰箱、天平、显微镜、水浴锅、摇床与转床、蒸馏水发生器、酸度计、离心机等 各类玻璃器皿：培养器皿（试管、三角瓶、培养皿、圆形培养瓶或果酱瓶等）分注器、离心管、刻度移液管、细菌过滤器、实验器皿（量筒、烧杯、容量瓶、试剂瓶、塑料瓶、酒精灯等） 器械用具：镊子、尖头镊子、枪形镊子、剪刀、解剖刀、接种针、钻孔器等。 二、培养基 1、培养基的成分：（1）无机营养元素（大量元素、微量元素）（2）有机化合物（维生素、肌醇、氨基酸）（3）植物生长调节剂(IAA、CTK、GA3)（4）碳水化合物eg蔗糖（5）其他有机添加物eg椰乳10-20%、香蕉150-200ml/l、酵母提取液0.01%-0.05% 【Notice】 生长素作用：诱导愈伤组织形成、促进细胞分化计伸长、促进生根等 细胞分裂素作用：促进细胞分裂与扩大、诱导芽分化，促进测芽萌发，使茎增粗，抑制茎伸长、抑制跟分化等 赤霉素作用：促进幼芽伸长生长，促进不定胚发育成小植株。（用于解除休眠） IAA/GA 高，促进植物根分化 IAA/GA 相近，促进愈伤组织生成 IAA/GA 低 ，促进不定芽的分化 (6)培养材料的支撑物---琼脂 6-7g/l （7）抗生物质（防止菌类污染）eg;青霉素、链霉素、庆大霉素等 5-20mg/l （8）活性炭（吸附作用）（9）水 2、培养基PH=5.6—5.8 3、常用培养基的种类特点 （1）MS培养基：1926年有Murarshige 和 Skoog 为培养烟草细胞而设计的。 特点：无机离子浓度高。有高浓度的N、K，硝酸盐量大，营养丰富。 （2）White 培养基：1934年White 为