细胞生物学综合实验报告.doc

本科学生实验报告 学号 姓名 学院 生命科学学院 专业、班级 实验课程名称 细胞生物学实验 指导教师及职称 王莎莎 开课时间 2013 至 2014 学年 第一 学期 填报时间 2013 年 10 月 13 日 云南师范大学教务处编印 实验名称：实验五、宫颈癌HeLa细胞株培养 实验时间：星期二 上午一、二节课 小组合作：是 一、实验预习 实验目的 （一）、细胞培养准备工作（清洗、消毒、灭菌） 能独立地进行用于细胞培养的个中器皿的清洗与消毒，掌握干热灭菌法、湿热灭菌法和滤过除菌法的操作，了解化学消毒法的使用方法。 （二）、培养基的配制 熟练掌握RPMI 1640培养基的配制方法。 （三）、细胞传代培养 (熟练掌握细胞传代培养的操作方法； 　 (观察外培细胞在不同时期的形态变化及生长状况。 死活细胞的鉴别 掌握死活细胞的鉴别原理及方法 实验设备及材料 （一）细胞培养准备工作（清洗、消毒、灭菌） 　 (仪器：超净工作台、干燥箱、高压锅、过滤器 (材料：微孔滤膜（直径25mm）：孔径为0.22um 　　 (试剂：75%酒精、重铬酸钾、浓硫酸、NaOH、 HCl等 （二）培养基的配制 　　 (仪器：超净工作台、高压灭菌锅、多重蒸馏水、器磁力搅拌器、天平、微量加样器 (材料：细胞培养瓶、量筒、研钵、烧杯、漏斗、滤纸、pH试纸、微孔过滤器（0.22μm）及注射器、各种规格的Tip 、离心管 　　 (试剂：NaOH、 酚红 、RPMI 1640干粉、小牛血清、青霉素、链霉素、NaHCO3 、L-谷氨酰胺 （三）细胞传代培养 　　 (仪器：超净工作台、微量加样器（移液枪）、倒置显微镜、光学显微镜、高压灭菌锅、蒸馏水器、超低温冰箱 二氧化碳培养箱 　　 (材料：细胞培养瓶、血球计数板、滴管、培养细胞 　 (试剂：台盼蓝（染料）、乙醇 （四）死活细胞的鉴别 　　 (仪器：显微镜、血球计数板 　　 (材料：结肠腺癌320细胞 (试剂：0.4%台盼蓝溶液 实验原理及实验流程或装置示意图： （一）原理及示意图： 　　1、细胞培养准备工作（清洗、消毒、灭菌） 原理： （1）清洗与消毒是组织培养实验的第一步，是组织培养中工作量最大，也是最基本的步骤。 （2）体外培养细胞所使用的各种玻璃或塑料器皿对清洁和无菌操作的要求程度很高。细胞培养不好与清洗不彻底有很大关系。 （3）灭菌手段的选择也十分重要，对不同的物品需采用不同的灭菌方法。假如选用的方法不对，即使达到了无菌却使被灭菌药品丧失了→营养价值、生物学特性或其他使用价值也不行。 流程： 　　 　　2、培养基的配制 细胞培养使用的培养基一般是由合成培养基和小牛血清配制而成。合成培养基有商品出售，它是根据细胞生长的需要按一定配方制成的粉状物质。其主要成分是氨基酸、维生素、碳水化合物、无机离子和其他辅助物质。它的酸碱度和渗透压与活体内细胞外液相似。 流程 ： 　　3、细胞传代培养 （1）当原代培养细胞或细胞系细胞增殖达到一定密度后，则需要在培养，即将培养的洗吧分散后，以适当的比率转移到另一个或几个容器中扩大培养，此过程为传代培养 。 （2）悬浮型细胞培养常见于淋巴细胞、白血病细胞、骨髓瘤细胞和腹水型恶性细胞等的培养。由于这类细胞或细胞集体可悬浮在液体培养基中，而不附着在固体表面上，因此无论原代培养或传代培养的细胞增殖过程都没有贴附性细胞那种明显可辨的3个变化阶段，其培养的可见效果是细胞数目的增多及溶液中细胞浓度和密度的加大 （3）悬浮型细胞传代培养的最大特点是原代细胞不必经过机械分离或消化酶消化处理，传代时只须把培养的悬浮细胞做适度稀释或把培养细胞经简单的离心处理后再加入适量的培养液即可培养。因此，细胞在从原代到传代的转变过程中遭受的机械损伤和化学损伤的可能性较少，损伤程度也较轻，相对而言，传代的成功率较高。 流程： 4、死活细胞的鉴别 （1）.细胞的存活率是反映细胞群体生活状态的重要指标。多种方法可以鉴别细胞的死活，最常用到的方法是染色排除法。 （2）.许多酸性物质不容易穿过活细胞的质膜进入胞内，却能渗入死的细胞内，使其着色，以次来区别死活细胞。 　　流程：制片 计数