辣木黄酮和多糖提取方法及其含量影响因素的初步研究.doc

辣木黄酮和多糖提取方法及其含量影响因素的初步研究 A 水提法 5.45 5.45 5.44 5.44 8.021E-03 a A 超声法 4.78 4.47 4.73 4.75 2.571E-02 b B 离心法 4.03 4.02 4.04 4.03 6.000E-03 c C 分级法 4.02 4.03 4.01 4.02 7.024E-03 c C 采用水提取、有机溶剂回流提取、有机溶剂离心提取、超声波提取和分级沉淀提取等五种方法对辣木叶粉中总黄酮进行了提取，提取效果如表3所示。五种方法都能从辣木中提出黄酮。但在不同的提取方法下辣木叶总黄酮量不同，范围在4.018％～5.435％之间，总黄酮量较高的是回流法和水提法，超声法次之，总黄酮量量较低的是离心法和分级沉淀法。其中回流法和水提法差异不显著，但显著高于其他三种方法.离心法和分级沉淀法差异不显著。 3.1.1.2芦丁标准曲线制作及稳定性试验 本研究以最小二乘法作线形回归方程，得芦丁质量浓度C(mg／m1)与吸光度A的关系为：A=9.2832C-0.0034，相关系数r=0.9999.在0.019-0.090 mg／ml范围内。吸 光度与浓度线形关系良好. 准确吸取芦丁标准溶液1.0ml，分置于10ml容量瓶中，各加乙醇至5ml；余下步骤按2.3.1.4芦丁标准曲线的制作方法操作，测定结果见图l。试验表明，在室温≤25℃的环境中，显色时问在15～70min范围内，吸光度没有变化。80min以后开始下降。因此，在本试验选择的测定时间内，黄酮类化合物与铝离子生成的络合物显色是稳定的。 图1 芦丁标准品稳定性 3.1.1.3不同提取溶剂对辣木叶总黄酮量的影响 表4 不同溶剂回流的辣木叶总黄酮量 溶剂 黄酮总量/% 显著性 1 2 3 平均值 标准差 F0.06 F0.04 乙醇 5.45 5.47 5.39 5.43 4.067E-02 a A 甲醇 5.44 5.41 5.42 5.42 1.358E-02 a A 丙酮 4.79 4.80 4.79 4.79 6.506E-03 b B 根据3.1.1.1方法的比较。回流法提取的辣木叶总黄酮量最高，在此基础上其他条件一致，选用三种不同的溶剂对辣木叶干粉中黄酮进行了回流提取，结果如表4。从表中可以看出。回流法的提取溶剂以乙醇最好，甲醇次之，丙酮最差。差异性分析表明用乙醇做溶剂和用丙酮傲溶剂有显著性差异.而乙醇溶剂和甲醇溶剂之间则没有显著性差异。但从经济、安全方面考虑，用乙醇作溶剂更为实用。 综合以上结果可知。用水提法、甲醇回流法和乙醇回流法均对辣木总黄酮具有较高的提取率。从经济、安全、实用方面考虑，乙醇回流法是最适合辣木总黄酮的提取方法。 3.1.1.4乙醇浓度对辣木叶总黄酮量的影响 其他条件相同的时候，分别以不同浓度的乙醇溶液回流提取黄酮。从图2可以看出：乙醇浓度在60%～80%的范围内辣木叶总黄酮量较高，其中以70％的乙醇提取效果最好，总黄酮量可达到6.27％；乙醇浓度高于80％提取效果显著降低，从6.11％下降到4.71％。这是由于乙醇浓度过高，使黄酮类化合物的溶解度下降，而脂溶性物质的溶出量增加，从而导致黄酮类化舍物的浸出率下降。 图2 不同乙醇浓度下提取的辣木叶总黄酮量 条件：5g，70℃，乙醇用量20倍，回流3次，每次120min 3.1.1.5乙醇用量对辣木叶总黄酮量的影响 如图3所示，随乙醇用量的增加，辣木叶总黄酮量呈梯度变化。其中乙醇用量由10倍上升到20倍时，黄酮类物质浸出率上升比较快，由5.40％上升到6.27％.总黄酮量达到最大；乙醇用量在20倍以后。辣木叶总黄酮有所下降，但在乙醇用量为25倍时。总黄酮量变化不明显。乙醇用量越大，浓度梯度越大，物质溶出越多，但是当达到平街后再增大溶剂量.浸出物的变化就不明显了，所以20倍的乙醇用量是一个平衡点。 图4不同条件下提取的辣木叶总黄酮量 条件：5g，70%乙醇20倍，回流3次，每次120min 3.1.1.7提取时间对辣木叶总黄酮量的影响 其它条件一定时，考察提取时间对提取效果的影响。从图5可以看出：随着提取时间的增加.辣木叶总黄酮量增加，提取时间达到120min时，总黄酮量达到最大，当提取时间继续加长时，对总黄酮量的影响不大，表明提取时间达到120min时，有效成分已基本溶出。 图5 不同提取时间下提取的辣木叶总黄酮量 条件：5g，70℃，70%乙醇20倍，回流3次 3.1.1.8提取次数对辣木叶总黄酮量的影响 如图6所示，其他条件一致的情况下.随提取次数的增加，辣木叶总黄酮量呈上升的趋势。当提取次数到4次时，总黄酮量变化不大，说明提取4次以后，有效成分已基本溶出。 图6不同提取次数下提取的辣