抗生素微生物检定法.doc

抗生素微生物检定法 来源：中国药典2000年版二部附录 2006-12-10 00:30 标题 抗生素微生物检定法 附录序号 附录 内容全文 　　A. 抗生素微生物检定法　　本法系利用抗生素在琼脂培养基内的扩散作用，采用量反应平行线原理的设计，比较标准品与供试品两者对接种的试验菌产生抑菌圈的大小，以测定供试品效价的一种方法。　　标准品的品种、分子式及理论计算值见表2。　　培养基及其制备方法　　培养基Ｉ　　胨　5g　琼脂　15～20g　牛肉浸出粉　3g　水　1000ml　磷酸氢二钾　3g　　除琼脂外，混合上述成分，调节pH使比最终的pH值略高0.2～0.4，加入琼脂，加热溶化后滤过，调节pH值使灭菌后为7.8～8.0或6.5～6.6，在115灭菌30分钟。　　培养基　　胨　6g　葡萄糖　1g　牛肉浸出粉　1.5g　琼脂　15～20g　酵母浸出粉　6g　水　1000ml　　除琼脂和葡萄糖外，混合上述成分，调节pH使比最终的pH值略高0.2～0.4，加入琼脂，加热溶化后滤过,加葡萄糖溶解后,摇匀,调节pH值使灭菌后为7.8～8.0或6.5～6.6,在115灭菌30分钟。　　培养基　　胨　5g　磷酸氢二钾　3.68g　牛肉浸出粉　1.5g　磷酸二氢钾　1.32g　酵母浸出粉　3g　葡萄糖　1g　氯化钠　3.5g　水　1000ml　　除葡萄糖外，混合上述成分，加热溶化后滤过，加葡萄糖溶解后，摇匀，调节pH值使灭菌后为7.0～7.2，在115灭菌30分钟。　　培养基　　胨　10g　葡萄糖　10g　氯化钠　10g　琼脂　20～30g　枸橼酸钠　10g　水　1000ml　　除琼脂和葡萄糖外，混合上述成分，调节pH使比最终的pH值略高0.2～0.4，加入琼脂，在109加热15分钟，于70以上保温静置1小时后滤过，加葡萄糖溶解后，摇匀，调节pH值使灭菌后为6.0～6.2，在115灭菌30分钟。　　培养基　　胨　10g　琼脂　15～20g　麦芽糖　40g　水　1000ml　　除琼脂和麦芽糖外，混合上述成分，调节pH使比最终的pH值略高 0.2～0.4，加入琼脂，加热溶化后滤过，加麦芽糖溶解后，摇匀， 调节pH值使灭菌后为7.2～7.4，按需要分装，在115灭菌30分钟，趁热斜放使凝固成斜面。　　培养基　　　　胨　8g　磷酸二氢钾　1g　牛肉浸出粉　3g　 　　葡萄糖　2.5g　酵母浸出粉　5g　琼脂　15～20g　氯化钠　45g　水　1000ml　磷酸氢二钾　3.3g　　除琼脂和葡萄糖外，混合上述成分，调节pH使比最终的pH值略高0.2～0.4，加入琼脂，加热溶化后滤过，加葡萄糖溶解后，摇匀，调节pH值使灭菌后为7.2～7.4,在115灭菌30分钟。　　培养基　　胨　5g　枸橼酸钠　10g　牛肉浸出粉　3g　琼脂　15～20g　磷酸氢二钾　7g　水　1000ml　磷酸二氢钾　3g　　除琼脂外，混合上述成分，调节pH使比最终的pH值略高0.2～0.4，加入琼脂，加热溶化后滤过，调节pH值使灭菌后为6.5～6.6，在115灭菌30分钟。　　培养基　　酵母浸出粉　1g　琼脂　15～20g　硫酸铵　1g　磷酸盐缓冲液(pH6.0)　1000ml　葡萄糖　5g　　混合上述成分，加热溶化后滤过，在115灭菌30分钟。　　营养琼脂培养基　　胨　　10g　　琼脂　　15～20g　　氯化钠　　5g　　肉浸液　　1000ml　　除琼脂外，混合上述成分，调节pH使比最终的pH值略高0.2～0.4，加入琼脂，加热溶化后滤过，调节pH值使灭菌后为 7.2～7.4，分装，在115灭菌30分钟，趁热斜放使凝固成斜面。　　培养基可以采用相同成分的干燥培养基代替，临用时，照使用说明配制和灭菌，备用。　　灭菌缓冲液　　磷酸盐缓冲液(pH6.0) 取磷酸氢二钾2g与磷酸二氢钾8g，加水使成1000ml，滤过，在115灭菌30分钟。　　磷酸盐缓冲液(pH7.8) 取磷酸氢二钾5.59g与磷酸二氢钾0.41g，加水使成1000ml，滤过，在115灭菌30分钟。　　磷酸盐缓冲液(pH10.5) 取磷酸氢二钾35g，加10mol/L氢氧化钾溶液2ml，加水使成1000ml，滤过，在115灭菌30分钟。　　菌悬液的制备　　枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）悬液　　取枯草芽孢杆菌［CMCC（B） 63501］的营养琼脂斜面培养物，接种于盛有营养琼脂培养基的培养瓶中，在35～37培养7日,用革兰氏染色法涂片镜检，应有芽孢85％以上。用灭菌水将芽孢洗下，在65加热30分钟，备用。　　短小芽孢杆菌（Bacillus pumilus）悬液　取短小芽孢杆菌［CMCC（B）63202］的营养琼脂斜面