植物细胞组织培养的基本技术(版)分析报告.doc

本章主要内容 商业性组织培养实验室和小工厂的设计与主要设备 培养基及其配制 外植体的选择与培养 试管苗的驯化与移载 第一节 商业性组织培养实验室和小工厂的设计与主要设备 培养皿的清洗； 培养基的配制、分装和高压灭菌； 无菌操作——材料的表面灭菌和接种； 将培养物放到培养室培养； 试管苗的驯化、移栽和初期管理。 (一)、洗涤室(cleaning room) 洗涤室用于完成玻璃器皿等仪器的清洗、干燥和贮存。 室内配备： 大型水槽，最好是白瓷水槽。为防止碰坏玻璃器皿，可铺垫橡胶。上下水道要畅通。 备有塑料筐，用于运输培养器皿。 备有干燥架，用于放置干燥涮净的培养器皿。 (二)、准备室(repairing room) 完成培养基制备以及试管苗出瓶、清洗与整理工作。准备室要求明亮、通风。 如果房间较多，可将准备室分为洗涤室和配置室两部分。洗涤室专门负责试管苗出瓶与培养器皿的清洗工作；配置室则负责培养基的配制、分装、包扎和高压灭菌等工作。 (三)、缓冲室 进入无菌室前要在缓冲室里换上经过灭菌的卫生服、拖鞋，戴上口罩。 应当在此室内安装灭菌用的紫外灯。控制无菌室及培养室的配电板等。 (四)、无菌操作室(transfering room) 接种室是进行植物材料的分离接种及培养物转移的一个重要操作室。其无菌条件的好坏对组织培养成功与否起重要作用。 配置： 在工作方便的前提下，接种室宜小不宜大，一般7-8m2，要求地面、天花板及四壁尽可能密闭光滑，易于清洁和消毒。配置拉动门，以减少开关门时的空气扰动。 接种室要求干爽安静，清洁明亮。在适当位置吊装1-2盏紫外线灭菌灯，用以照射灭菌。最好安装一小型空调，使室温可控，这样可使门窗紧闭，减少与外界空气对流。 (五)、培养室(culturing room) 培养室是将接种的材料进行培养生长的场所。培养室的大小可根据需要培养架的大小、数目、及其他附属设备而定。 设计原则： 充分利用空间和节省 能源 高度比培养架略高为 宜 周围墙壁要求有绝热 防火的性能。 (五)、培养室(culturing room) 培养架大多由金属制成。 规格： 一般设5层，最低一层离地高约10 cm，其他每层间隔30cm左右，培养架即高1.7m左右。培养架长度都是根据日光灯的长度而设计，如采用40W日光灯，则长1.3 m，30 W的长1m，宽度一般为60cm。 培养室最重要的因子是温度，一般保持在20-27℃左右，具备产热装置，并安装窗式或立式空调机。由于热带植物和寒带植物等不同种类要求不同温度，最好不同种类有不同的培养室。室内湿度也要求恒定，相对湿度以保持在70％-80％为好，可安装加湿器。 控制日光照时间可安装定时开 关钟，一般需要每天光照10-16h。也有的需要连续照明。现代组培实验室大多设计为采用天然太阳光照作为主要能源，这样不但可以节省能源，而且组培苗接受太阳光生长良好，驯化易成活。 (六)、驯化室 驯化室要求清洁无菌，配有空调机、加湿器、恒温恒湿控制仪、喷雾器、光照调节装置、通风口以及必要的杀菌剂。 (七)、温室 应配有空调机、通风口、加湿器、恒温恒湿控制装置、喷雾装置、光照调节装置以及必要的杀菌杀虫装置及相应药剂。 二、仪器设备和器皿用具 常见仪器设备 1、超净台 2、无菌箱 3、空调机 4、除湿机 5、恒温箱 6、烘箱 7、高压灭菌锅 8、冰箱 9、电子分析天平和托盘天平 10、显微镜及解剖镜 11、水浴锅 12、摇床与转床 13、磁力搅拌器 14、电蒸馏水器 15、酸度计 16、离心机 1、超净台和无菌箱 1、超净台，优点是操作方便自如，比较舒适，工作效率高，准备时间短。开机10分钟即可操作，可进行长时间使用。在工厂化生产中，接种工作量很大，需要经常长久地工作时，超净台是很理想的设备。 2、无菌箱，在投资少的情况下，可以用接种箱来代替超净台。接种箱依靠密闭、药剂熏蒸和紫外灯照射来保证内部空间无菌。但操作活动受限制，准备时间长，工作效率低。 工作原理 超净台功率在145-260W左右，它装有小型鼓风机，使空气穿过一个前置过滤器，在这里把大部分空气尘埃先过滤掉，然后再使空气穿过一个细致的高效过滤器，它除去了大于0．3um的尘埃、细菌和真菌孢子等，最后以较洁净的气流吹到工作台面。超净空气的流速为每分钟24-30m，这已足够防止附近空气袭扰而引起的污染，这样的流速也不会妨碍采用酒精灯对器械等的灼烧消毒。在这样的无菌条件下操作，就可以保证无菌材料在转移接种过程中不受污染。 根据风幕形成的方式，超净台可分为水平式和垂直式二种型号。 （二）各类玻璃器皿 1、培养器皿 2、分注器 3、离心管 4、刻度移液管 5、细菌过滤器 6、实验