重组腺病毒介导突变型低氧诱导因子1α基因转染脂肪间充质干细胞并促进其增殖分析报告.doc

重组腺病毒介导突变型低氧诱导因子1α基因转染脂肪间充质 干细胞并促进其增殖 张 馨1，周 琳1，张晓雷2(鞍山市第三医院，1手外一病区，2外二病区，辽宁省鞍山市 114031) 引用本文：张馨，周琳，张晓雷. 重组腺病毒介导突变型低氧诱导因子1α基因转染脂肪间充质干细胞并促进其增殖[J].中国组织工程研究，2016，20(23):3386-3393. DOI: 10.3969/j.issn.2095-4344.2016.23.006 ORCID: 0000-0001-6630-1509(张馨) 文章快速阅读： 文题释义： 低氧诱导因子1α：低氧诱导因子1α是缺氧条件下广泛存在于哺乳动物和人体内的一种转录因子，对体内局部微环境中的氧浓度敏感。可提高组织和细胞在缺血环境下的生存能力，在促进血管再生，微血管系统的形成方面有重要的意义。 脂肪间充质干细胞：脂肪间充质干细胞作为脂肪组织的一种前体干细胞，它可参与到各种脂肪组织的重建过程，包括生长发育、肥胖、损伤或缺氧后的再修复以及机械力诱导的组织扩张等生理病理过程。 摘要 背景：为了提高移植组织的存活率，多数学者把研究的焦点放在了细胞治疗上，特别是经细胞辅助的脂肪移植领域。 目的：分析三点突变型低氧诱导因子1α转染脂肪间充质干细胞后促进脂肪移植成活率的作用。 方法：①利用目的片段重组三点突变型低氧诱导因子1α基因入腺病毒pAdEasy-1系统，包装病毒并测定滴度；②人脂肪间充质干细胞的培养传代及鉴定；③以3种病毒液连同空白组共分4组进行后续实验(实验组含三点突变型低氧诱导因子1α基因；阳性对照组；阴性对照组；空白组)；将病毒液转染入脂肪间充质干细胞内，通过示踪因子增强型绿色荧光蛋白观察病毒转染效率，检测各组细胞中低氧诱导因子1α基因mRNA和蛋白表达情况；④通过MTT法检测各组脂肪间充质干细胞的增殖情况。 结果与结论：①腺病毒重组体构建成功并包装成功，符合转染要求；②通过成脂诱导、成骨诱导及成软骨诱导鉴定证明脂肪间充质干细胞培养成功，可以作为后续实验的种子细胞；③RT-PCR结果显示，实验组和阳性对照组细胞内低氧诱导因子1α mRNA表达量均明显高于另外2组(P 0.05)；④Western blot检测显示，实验组蛋白表达相对吸光度值明显高于其他3组(P 0.05)；⑤实验组转染脂肪间充质干细胞后分裂增殖程度显著增加，组间比较差异有显著性意义(P 0.05)；⑥结果提示腺病毒介导的三点突变型低氧诱导因子1α基因转染脂肪间充质干细胞后不仅可以在常氧条件下持续表达目的蛋白，同时也能促进脂肪间充质干细胞的显著增殖，达到一种双赢的效果。 关键词： 干细胞；脂肪干细胞；脂肪间充质干细胞；低氧诱导因子1α；基因突变；脂肪移植；血管化 主题词： 脂肪组织；间充质干细胞；缺氧诱导因子1；组织工程 Recombinant adenovirus-mediated hypoxia inducible factor 1alpha mutant promotes proliferation of adipose-derived mesenchymal stem cells Zhang Xin1, Zhou Lin1, Zhang Xiao-lei2 (1First Ward of Hand Surgery, 2Second Ward of Hand Surgery, Third Hospital of Anshan, Anshan 114031, Liaoning Province, China) Abstract BACKGROUND: To improve the survival rate of transplanted tissue, most scholars focus on cell therapy, particularly cell-assisted fat grafting. OBJECTIVE: To analyze the effect of recombinant adenovirus-mediated hypoxia inducible factor 1alpha (HIF1α) mutant on survival rate of transplanted fat particles through transfection of adipose-derived mesenchymal stem cells. METHODS: Recombinant adenovirus-mediated triple-mutant HIF1α was inserted into an adenoviru