2.荧光分析方法-中国科技大学.ppt

3.其它用途 (1) 机械工业：利用荧光法进行金属制品的荧光探 伤。 (2)农业：荧光法常被用于检查农副产品的纯度、 鉴定种子的生活力、及早发现农副产品的败坏， 判断果实成熟的程度以及诊断农作物的病虫害等。 (3) 石油化学探矿：利用荧光法测定钻探水样、岩 石样、土样中石油裂解产物的荧光信息，从而辅助 判断地层中的贮油信息。 此外，在环境样品、半导体材料和食品添加剂 等试样中某些超痕量元素的分析中也可以一显身手。 复习思考题： 1. 荧光光谱产生的本质是什么？ 2. 有机化合物产生荧光光谱与其分子结构的关系 是什么？ 3. 荧光熄灭和熄灭剂的定义？有哪几种导致荧光 熄灭的类型？ 4. 荧光分析中有哪些影响因素？ 5. 荧光分析的特点及注意事项有哪些？ 6. 为什么荧光分析比紫外-可见分光光度分析的灵 敏度要高？ 参考书目： 1.《荧光分析法》，陈国珍，科学出版社，1975年 2.《分析化学》（下册），上海化工学院、成都工 学院，人民教育出版社，1979年 3.《仪器分析》，高等教育出版社，武汉大学化学 系编，2001年6月第一版 4.《实用仪器分析》，北京大学出版社，杨根元， 金瑞祥，应武林 主编，1997年9月第2版，1997年 9月第一次印刷。 5.《仪器分析》，陈允魁编著，上海交通大学出版 社，1992年11月第一版 6.《分子发光分析法（荧光法和磷光法）》复旦大 学出版社，祝大昌、陈剑宏、朱世盛译，1985年 12月第一版 7.《现代仪器分析实验与技术》，清华大学出版社， 陈培榕、邓勃主编，1999年12月第一版，2004年5 月第4次印刷。 b. 荧光的污染 荧光的污染源很多（如：活塞的润滑油、橡皮 塞和软木塞、去污粉、洗液、滤纸和微生物等）。 试验器皿须用1:1HNO3浸泡24小时或煮沸，再 用蒸馏水洗净，凉干备用。 ?3.5 荧光分析的实验技术 1. 荧光计的校正 （1）灵敏度的校正 荧光计的灵敏度可用被测出的最低信号来表示； 或用某一标准荧光物质的稀溶液在一定激发波长照 射下，能发射出最低信噪比时荧光物质的最低浓度 来表示。 荧光分光光度计的灵敏度与三方面有关： (a) 与仪器光源强度、单色器（包括透镜、反射镜 等）的性能、放大系统的特征和光电倍增管的灵敏 度有关； (b) 与所选用的波长及狭缝宽度有关； (c) 与空白溶剂的拉曼散射光、激发光和杂质荧光有 关。 由于影响荧光计灵敏度的因素很多，同一型号 的仪器，甚至同一台仪器，在不同时间操作所测得 的结果也不尽相同。 因而在每次测定时，在选定波长及狭缝宽度的 条件下，先用一种稳定的荧光物质，配成浓度一致 的标准溶液进行校正（或称：标定），使每次所测 得的荧光强度调节到相同的数值（50 %或100 %）。 如果被测物质所产生的荧光很稳定，自身就可作为 标准溶液。 从紫外区到可见区常用的标准荧光物质有：酚 （溶于甲醇）、吲哚（溶于乙醇）、奎宁（溶于 0.05 mol?L-1的H2SO4溶液）及荧光素（溶于水或乙 醇）等。 最常用的是硫酸奎宁，其产生的荧光十分稳定。 （2）波长校正 荧光分光光度计的波长刻度在出厂前一般都 经过校正，但若仪器的光学系统和检测器有所变 动，或在较长时间使用后，或在重要部件更换之 后，有必要用汞弧灯的标准谱线对单色器的波长 刻度重新校正，特别在精细分析工作中尤为重要。 （3）激发光谱和荧光光谱校正 用荧光分光光度计测得的激发光谱或荧光光谱， 往往是表观的，不是真实的。 其原因很多：单色器波长刻度不够准确；拉曼 散射光的影响以及狭缝宽度较大等，但这些因素都 可消除或得到校正。最主要的是光源的强度随波长 而变，检测器的响应与波长不成线性。 当用单光束荧光分光光度计测定激发光谱和 荧光光谱时，因为不用参比溶液作相对校正，影 响特别大。尤其是当峰的波长处在检测器灵敏度 曲线的陡坡时，误差最显著。 因此，先将每一波长的光源强度调整到一致 （用仪器附有的校正设备），然后根据表观光谱 上每一波长的强度除以检测器对每一波长的响应 强度进行校正，以消除这种误差。校正的方法常 由于仪器不同而不完全相同。 目前生产的荧光分光光度计大多采用双光束光 路，可用参比光束抵消光学误差。 2. 实验新技术 （1）时间分辨技术 时间分辨发光光谱技术是基于不同发光体的发 光衰减速率的不同，配置使用带时间延迟设备的脉 冲光源（闪光灯或激光器）和带有门控时间电路的 检测器件，通过选定延迟时