pct检测原理和溯源性课件.pptx

降钙素原的检测原理和溯源性复兴医院检验科张岩2015年7月18日主要内容降钙素原PCT生物特性、发展历史降钙素原PCT检测原理降钙素原PCT的溯源性PCT的生物学特点血清降钙素(CT)的前肽物质分子量：14.5 kDa由116个氨基酸组成的糖蛋白质无激素活性11号染色体上的单拷贝基因分解内源多肽酶降钙素转录降钙素原 PCT降钙素原前体细胞内特殊蛋白酶甲状腺滤泡细胞正常情况下在细菌感染/脓毒血症状态下，PCT在各个组织、器官大量形成并释放进入血液循环系统PCT 降钙素原正常情况下,主要局限于甲状腺和肺的神经内分泌细胞表达并裂解成降钙素PCT脓毒血症及促炎症细胞因子可诱导全身各种组织多种类型细胞表达和释放PCT PCT的生物学特点快速：感染开始后3小时即可测得，6-12小时后达到峰值峰值最高可达1000 ng/ml半衰期: 接近24 hrs几乎不受肾功能状态影响正常情况下，是降钙素的前体健康人血液中浓度非常低， 0.05ng/ml。当细菌感染时，PCT可生成并释放入血液循环PCT发现历史 在葡萄球菌中毒性休克的低钙血症机制研究中发现PCT，首次将PCT与脓毒症和炎症状态联系起来1983年1993年首次将PCT水平与细菌感染与指导抗生素使用联系1994年在健康受试者中注射内毒素，发现PCT的动力学特点1993年，发表在Lancet的关于PCT在儿童脓毒症及感染患者的首项前瞻性研究79名疑似感染儿童：无感染：PCT＜0.1ng/ml重度感染：PCT 6-56 ng/ml无全身表现的局部感染和病毒感染：PCT 0.3-1.5 ng/ml重度感染者抗生素治疗后PCT水平下降首次将PCT与细菌性感染及指导抗生素治疗联系起来1994年：在健康受试者中注射内毒素，发现PCT的动力学特点在一次内毒素刺激的人体试验中PCT的动力学变化PCT快速、高特异性的增长在脓毒症情况下，3-6小时即可检测到其水平的增长快速衰减 半衰期约20-24 小时 ，可以快速反映治疗效果IL-6CRPTNF-α血浆浓度IL-10时间(小时)Dandona P, et al. J Clin Endocrinol Metab. 1994;79(6):1605-8主要内容降钙素原PCT发展历史、生物特性降钙素原PCT的检测原理降钙素原 PCT的溯源性ECL检测原理：电化学发光免疫检测技术ElectroChemiLuminescence (ECL)施加电压启动化学发光反应结合Ruthenium 结合磁珠转移至电极;标记后免疫复合物与游离组分分离信号检测cobas e 601 立式型ECL检测原理免疫复合物的形成抗体第一抗体标记生物 素（与微磁珠结合）第二抗体标记Ruthenium（产生光信号）两种抗体皆能与靶抗原特异性结合抗原生物素Ruthenium免疫复合物抗体ECL检测原理生物素－链霉亲和素特异性亲和作用链霉亲和素抗原生物素抗体 磁珠磁珠ECL检测原理磁珠-提高反应灵敏度生物素与链霉素特异性亲和作用反应体系中待测抗原可最大限度地与磁珠结合提高检测反应的灵敏度形成的免疫复合物转移至测量池开始ECL反应ECL检测原理光电倍增管检测光信号电压ECL系统优势光信号产生迅速752.0601.6451.2电压(V)ECL信号强度 (‘000 counts)30.815.40000.51.01.5时间(秒)电压作为反应的启动开关能有效地保证发光反应稳定而可控地进行罗氏cobas e 601开展项目心肌标志物：超敏TNT、肌红蛋白、NT- pro BNP、肌酸激酶同工酶脓毒血症：IL-6、PCT肿瘤标志物：肿瘤相关抗原72－4、非小细胞肺癌相关抗原 21－1骨标志：甲状旁腺素、骨钙素、 25-羟基维生素D3、总 I 型胶原氨基端延长肽、 β－胶原特殊序列甲状腺功能：促甲状腺受体抗体激素：促肾上腺皮质激素、皮质醇、人生长激素、雌二醇、促卵泡成熟激素、黄体生成激素、孕酮、催乳素主要内容状降钙素原PCT发展历史、生物特性降钙素原PCT的检测原理降钙素原PCT的溯源性解决溯源性是临床检验结果准确性的关键ISO/IEC17025的质量体系中就提出对检验结果的三点要求：ISO/IEC17025:2005-5-15《检测和校准实验室能力的通用要求》溯源链上端测量结果可以在计量上可追溯至国际单位制（SI）的被测量 如电解质，代谢物，甾体激素及一些甲状腺激素测量结果不能在计量上可追溯至国际单位制（SI）的被测量可用的国际约定的参考测量程序国际约定校准物质有有如糖化血红蛋白有无如凝血因子无有如蛋白激素，某些抗体和肿瘤标志物无无如某些肿瘤标志物等，共300中组分， PCT也是其中之一制造商自行建立“自用”测量程序和标准品，为产品校准品定值 PCT的溯源性19 B·R·A·H·M·S建立的PCT溯源链上端：一级