实验四水果抗氧化活性的研究.doc

实验四 水果抗氧化活性的研究 一、实验目的： 通过用分光光度法测定常见水果所含有的抗氧化性物质的量并作比较，寻找当中较有助于抗衰老的水果种类，为大众通过食用水果抗衰老提供参考。 二、实验原理： （1）KMnO4具有强氧化性，能与还原性（即抗氧化性）物质反应，而各种水果汁中含有不等量的抗氧化物质，能与KMnO4反应。通过测出KMnO4与各种0.10mL水果汁反应后吸光度A1，然后测0.40mL KMnO4标准溶液稀释至50mL，后的吸光度A3，后者的吸光度减去前者的吸光度，并将计算得出的吸光度代入线性方程y=a+bx (y为吸光度，x为KMnO4的质量)，求出KMnO4质量的变化值，即得出每0.10mL水果汁液消耗的KMnO4的量m1，消耗KMnO4越多，则代表该水果中所含的抗氧化性物质越多。 三、实验试剂： 去离子水、KMnO4（AR）、Na2C2O4（AR）、H2SO4(3 mol/L)、纱布。 电炉、烧杯（250mL、100mL）、台式离心机、电子分析天平、722型分光光度计（比色皿）、移液管（1mL）、容量瓶（50mL）、锥形瓶（250mL）、量筒（50mL）、洗耳球，滤纸、温度计、棕色酸式滴定管（25mL）、电炉、试镜纸。 四、实验步骤： 1、0.01mol/L KMnO4标准溶液的配制及标定 将0.79g KMnO4置于大烧杯（500mL）中，加蒸馏水至500mL，煮沸约1小时，静置冷却后用漏斗过滤，滤液装入棕色细口瓶中，贴上标签，一周后标定,保存备用。准确称取0.055～0.075 g基准物质草酸钠3份，分别置于250mL的锥形瓶中，加约30mL水和3mol/L H2SO4 10mL，水浴慢慢加热到70～80℃（锥形瓶口出现水珠，逐份加热），趁热用KMnO4溶液滴定。根据草酸钠的质量和消耗KMnO4溶液的体积计算KMnO4浓度，并用同样方法滴定其他2份草酸溶液。 2MnO4-+5C2O42-+16H+=2Mn2++10CO2+8H20 2、KMnO4溶液最大吸收波长的确定 将已知浓度的KMnO4溶液放进722型分光光度计中，以蒸馏水作参比，从波长为400nm到610nm，测定KMnO4溶液的吸光度，取最大吸收波长。（取适当浓度，0.3或0.4稀释于50mL的容量瓶中） 3、KMnO4溶液标准曲线测定 取8个容量瓶并标号1～8，向50mL容量瓶依次准确加入0、0.05、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6mLKMnO4标准溶液，然后用蒸馏水定容后摇匀，静置。以蒸馏水为参比，以KMnO4溶液最大吸收波长测定各浓度KMnO4的吸光度，作出KMnO4标准溶液的标准曲线,找出线性回归方程。 4、水果样品抗氧化性测定 将所有水果样品用自来水、蒸馏水反复冲洗干净后，用水果刀切碎，再用纱布包好挤出果汁约20mL，并用4000 rpm 离心机离心5 min后取上清液，备用。用移液管取0.20mL水果汁液和0.80mL KMnO4标准溶液于100mL容量瓶中，用蒸馏水定容，静置30min。用移液管取0.10mL水果汁液于50mL容量瓶中，并用蒸馏水定容，测定其吸光度，消除水果液汁的背景干扰。然后用蒸馏水做参比，用722型分光光度计测定水果汁液样品中反应后KMnO4的吸光度A1,平均测三次。最后，用0.4mL KMnO4标准溶液稀释至50mL的吸光度A3减去水果汁液样品中反应后KMnO4的吸光度A1以及背景值，得出的吸光度用线性方程算出水果样品消耗的KMnO4量m1。 五、实验结果： 1、KMnO4标准溶液的标定 样品号 1 2 3 m（Na2C2O4）（g） KMnO4终读数（mL） KMnO4初读数（mL） VKMnO4(mL) CKMnO4(mol/L) CKMnO4(mol/L)平均值 绝对偏差 相对平均偏差（%） 2、KMnO4溶液的最大吸收波长 波长nm 400 410 420 430 440 450 460 470 480 吸光度A 波长nm 490 500 510 520 522 524 526 528 530 吸光度A 波长nm 532 540 550 560 570 580 590 600 610 吸光度A 以吸光度为纵坐标，波长为横坐标绘制曲线： 波长nm 图1 KMnO4溶液的吸收曲线 KMnO4溶液的最大吸收波长为__________nm。 3、绘制KMnO4的标准曲线 项目 1 2 3 4 5 6 7 8 加入KMnO4的量（mL） 0 0.1