微生物菌种冻干机厌氧菌冷冻干燥管的制备.docx

微生物菌种冻干机：厌氧菌冷冻干燥管的制备 真空冻干机是在抽真空的状态下让物质在低温下干燥的设备，主要用于微生物制剂和生物活性物质的干燥。菌种保藏室用来对微生物进行真空冻干保藏。微生物冷冻干燥法是长期保藏菌种的较好方法之一。因其便于批量生产、长期保藏成活力高，保藏和运输设备简单而成为一种普遍使用的保藏方法，已广泛应用于保存大部分细菌、真菌和一些病毒。1.安瓿管准备 安瓿管材料以中性玻璃为宜。清洗安瓿管时，先用2%盐酸浸泡过夜，自来水冲洗干净后，用蒸馏水浸泡至pH中性，干燥后、贴上标签，标上菌号及时间，加入脱脂棉塞后，121℃下高压灭菌15-20分钟，备用。2.保护剂的选择和准备 保护剂种类要根据微生物类别选择。配制保护剂时，应注意其浓度及pH值，以及灭菌方法。如血清，可用过滤灭菌；牛奶要先脱脂，用离心方法去除上层油脂，一般在100℃间歇煮沸2-3次，每次10-30分钟，备用。3.冻干样品的准备 在最适宜的培养条件下将细胞培养至静止期或成熟期，进行纯度检查后（参见科技部自然科技资源平台联合管理办公室文件《微生物菌种纯度检测技术规程》（试行）），与保护剂混合均匀，分装。微生物培养物浓度以细胞或孢子不少于108-1010个ml为宜（以大肠杆菌为例，为了取得每毫升1010个活细胞菌液2毫升-2.5毫升，只需10毫升琼脂斜面两支）。采用较长的毛细滴管，直接滴入安瓿管底部，注意不要溅污上部管壁，每管分装量约0.1-0.2毫升，若是球形安瓿管，装量为半个球部。若是液体培养的微生物，应离心去除培养基，然后将培养物与保护剂混匀，再分装于安瓿管中。分装安瓿管时间尽量要短，最好在1-2小时内分装完毕并预冻。分装时应注意在无菌条件下操作。4.预冻 一般预冻2小时以上，温度达到-20℃到-35℃左右。5.冷冻干燥 采用冷冻干燥机进行冷冻干燥。将冷冻后的样品安瓿管置于冷冻干燥机的干燥箱内，开始冷冻干燥，时间一般为8-20小时。终止干燥时间应根据下列情况判断：—— 安瓿管内冻干物呈酥块状或松散片状—— 真空度接近空载时的最高值—— 样品温度与管外温度接近—— 选用1-2支对照管，其水份与菌悬液同量，视为干燥完结—— 选用一个安瓿管，装1-2%氯化钴，如变深兰色，可视为干燥完结冷冻干燥完毕后，取出样品安瓿管置于干燥器内，备用。6.真空封口及真空检验 将安瓿管颈部用强火焰拉细，然后采用真空泵抽真空，在真空条件下将安瓿管颈部加热熔封。熔封后的干燥管可采用高频电火花真空测定仪测定真空度。7.保藏 安瓿管应低温避光保藏。8.质量检查 冷冻干燥后抽取若干支安瓿管进行各项指标检查，如存活率、生产能力、形态变异、杂菌污染等。9.冷冻干燥法适用范围 适用于大多数细菌、放线菌、病毒、噬菌体、立克次体、霉菌和酵母等的保藏，但不适于霉菌的菌丝型、菇类、藻类和原虫等。10.保藏周期 不同微生物复苏周期不同，一般10年左右。11.复苏方法—— 先用70%酒精棉花擦拭安瓿上部，—— 将安瓿管顶部烧热，—— 用无菌棉签沾冷水，在顶部擦一圈，顶部出现裂纹，用挫刀或镊子颈部轻叩一下，敲下已开裂的安瓿管的顶端，—— 用无菌水或培养液溶解菌块，使用无菌吸管移入新鲜培养基上，进行适温培养。冷冻干燥机系列：真空冷冻干燥机简称冻干机，经真空冷冻干燥处理的物品易于长期保存，加水后能恢复到冻干前的状态并保持原有的生化特性，对热敏性物质如抗生素、疫苗、血液制品、酶激素及其他生物组织，冻干技术非常适用，广泛应用于医学、制药、生物研究、化工和食品等领域。本系列分为四种：普通型、压盖型、多岐管普通型和多岐管压盖型。优于同类冷冻干燥机的十大特点：液晶显示干燥曲线。DSC-5型控制器，控温精确。配有通讯接口，提供给用户干燥过程的更多信息。 冷阱带有预冻功能，省去了低温冰箱的费用。丹佛斯压缩机，噪音小、功率大、寿命长。混合环保制冷剂，绿色环保，制冷量大。内置换热器，有效降低冷阱温度，捕水能力强。防返油真空泵，防止物料的污染。可配有电除霜功能。实验室小型冷冻干燥机：YB-FD-1/12/18系列冷冻干燥机：YB-FD-1/12/18冷冻干燥机，少量样品可直接在冷阱内预冻，适用于实验室使用或少量生产，可满足大多数实验室常规冻干的需求。主要特点： ● 符合国际标准的绿色环保型； ● 中文界面，显示干燥曲线； ● 冷阱开口大，无内盘管，带样品预冻功能； ● 预冷架，可作导流桶，加快干燥速度； ● 冷阱和操作面为全不锈钢，耐腐蚀易光洁； ● 透明钟罩式干燥室，安全直观； ● 不锈钢样品架，普通型样品盘间距可调； ● 设计新颖，体积小操作方便，减少实验室台面占用。 ● 可选加有氮气充气阀。技术参数：型号单位YB-FD-1YB-FD-12YB-FD-18规格压盖型普通型压盖型普通型压盖型普通型冻干面积m20.080.10.080