泸州医学院设计性满分产前诊断报告.doc

泸州医学院 本科学生设计性实验报告 专业 临床医学 年级 2011 班级 组长姓名 小组成员 课程名称 医学遗传学实验 时 间 2013年6月15日 实验设计方案： 实验名称 产前诊断--羊膜穿刺术-确诊唐氏综合症 指导教师 总体设计思路： 因为该孕妇的各项指标均正常，且她与其丈夫的核型检查均正常，但张某血清的AFP ,hCG和uE3检查结果阳性，表明张某所孕胎儿具有21三体的高风险，为了确诊病情，并且考虑到张某是中期孕妇，所以我们组决定采用羊膜穿刺术来对产妇进行进一步的产前诊断。因为羊水抽取的最佳时间是妊娠中期，此时羊水量多，胎儿浮动，穿刺时进针容易，且不易伤及胎儿，引起流产的风险低。此外，此项技术引起的母体感染，Rh溶血和其他妇科并发症发生率更低。据此，我们选择了该种技术。而且此法成本低，准确度高，对于工薪家庭的张某来说在可以接受的范围。 此次诊断还运用到了体外细胞培养，Giemsa染色等技术。 诊断的主要步骤是： 取材 离心分离 体外细胞培养 制片 显带 核型分析 此次诊断的目的就是根据核型分析的结果，确诊张某肚中胎儿是否患有唐氏综合征。以便提出科学，合理的建议 ，从而防止预防遗传病患儿出生，减少群体中遗传病的发病率。 具体设计方案： 1．实验目的 掌握遗传病的产前诊断过程，通过对21三体综合征的诊断设计，培养运用遗传学现代技术解决医学实际问题的能力。 为张某的妊娠提供最实际帮助，如果检测出胎儿患病，则建议其流产，若胎儿正常，则建议其生下。 实验原理 1). 羊水中有一定数量胎儿脱落细胞，通过羊膜穿刺获取羊水中的胎儿细胞，经体外培养后通过G显带实验进行核型分析，判断染色体是否畸形，诊断是否患有21三体综合征。2. G显带是指以Giemsa染料染色后，使染色体显带的技术。Giemsa染料是由噻嗪和曙红组成的，着色时DNA先于2个噻嗪分子结合，然后再与一个曙红分子结合，形成沉淀物，而DNA的某些部位对染料不敏感，由此形成明暗相间的条带。 3实验材料、试剂及器材 1) 材料 羊水及里面的胎儿细胞。 2) 试剂 ：pH6.8 PBS，Giemsa，0.025%胰蛋白酶（取0.9%氯化钠100ml，加0.25%胰蛋白酶1ml）。秋水仙素。 3 )主要仪器 ：离心管，离心机，天平，37℃温箱，载玻片，盖玻片，恒温水浴锅，光学显微镜，标本板，玻璃铅笔，定时钟，染色缸，直柄虹膜镊，滴管。 实验方法及注意事项 方法步骤： 取材 　　 羊膜腔穿刺术取羊水：B超定位，确定胎盘位置及羊水最佳穿刺点，常规无菌消毒，经腹壁行羊膜腔穿刺术。先用5 ml注射器抽取约2 ml羊水，观察羊水 颜色、浑浊度，弃去，再换20 ml注射器抽取30 ml羊水，密封注射器，无菌条件下立即送检。 体外细胞培养 制片： 1）在B 超引导下，取羊水20 mL 置入 2 支15 mL 的无菌离心管中。 2）羊水细胞培养羊水离心后，弃上清，每管留 0.5 mL 打匀后接种到25 cm2 培养瓶中， 加入3 mL培养基，每例样本接种两瓶，放入到37℃、5％ CO2培养箱中培养。第6 天取出换液，第7 天取出培养瓶，在倒置显微镜观察，见到较多的圆而亮的克隆细胞，进行传代。 3） 羊水细胞染色体制片加入秋水仙素30 μL，置于37℃、5％ CO2培养箱中继续培养4 h，用胰酶消化，进行低渗、预固定、固定、冰片滴片等操作步骤。每标本滴片4 张，在65℃的烤箱中烤过夜，行胰酶消化，Giemsa 染色。 显带 1）、将制好的染色体标本，置72℃～75℃烤箱中烤片3h。 2）、放入预温至37℃的0.025%胰酶溶液中（pH=7.2