病毒期末简版.doc

1、病毒PCR检测的原理 ①几乎所有的病毒都含有核酸 ②.每种病毒的核酸都会有自身特异的序列 ③.即便是同种病毒,不同分离株间也有序列上的差别 PCR检测的目标就是核酸的序列 病毒PCR检测的设计 ①检测病毒蛋白基因的保守序列，如核蛋白基因,而不选用变异较大的纤突蛋白 ②如果区分比较相近的病毒,则要寻找细微的差别处,经常针对变异的地方 3、细胞病变CPE：在体外实验中，通过细胞培养和接种杀伤性病毒，经过一定时间后，可用显微镜观察到细胞变圆、坏死、从瓶壁脱落等现象，称之为细胞病变作用。 表现形式：细胞变圆、聚集、坏死、脱落等。CPE具有病毒“种”的特性 4、.病毒感染力的滴定 LD50 半数致死量 EID50 半数鸡胚感染量 TCID50 半数细胞培养物感染量 5、电子显微镜：投射电子显微镜、扫描电子显微镜 大型电子显微镜 20-100万倍 0.144-0.34nm 中型电子显微镜 5-20万倍 0.34-1.0nm 小型电子显微镜 5万倍以下 1.0nm以上 负染色：也叫阴性反差染色。这种染色法是用重金属盐类溶液与样品混合而使样品呈现出良好的反差。经这种方法染色的生物样品，在电镜下是暗背景下的亮物体像，与通常的染色性质相反，所以称之为负染色。 病毒的免疫—血清学检测分类： 中和试验、血凝和血凝抑制试验、补体结合实验、酶联免疫吸附实验、琼脂扩散实验、荧光抗体实验 8、中和抗体：受病毒感染后体内产生抗体，如果该抗体能与相应的病毒粒子特异性结合，使后者丧失感染力。中和抗体一般是针对病毒的蛋白衣壳或囊膜抗原的，并不是针对病毒粒子的内部成分。 9、中和实验的应用 ①对病毒的鉴定，尤其是新分离的病毒 ②检测其他血清学反应难以测出的病毒株间的抗原差异 ③评价疫苗的免疫效果 10、蚀斑 PFU：病毒蚀斑(又叫空斑)如同噬菌体的噬斑，一个蚀斑为一个病毒体的繁殖后代品系。 11、血凝效价：能够使50%红细胞凝集的血凝素的最高稀释度作为该血凝素的血凝效价，即一个血凝素单位 11、差速离子法：适用于从组织培养液、鸡胚尿囊液或经过红细胞吸附-释放的病毒悬液中提纯病毒。以差速离心法分离提纯病毒时，经常以低速（2000~3000rpm，20-30分钟）及中速（10000rpm，20-30分钟）去除较大的宿主细胞碎片、污染的细菌及其他较大的杂质。然后，选择在60分钟内能够沉淀80%以上的病毒粒子的较高速度，离心1-2小时，使病毒沉淀。对中、大型病毒如流行性感冒病毒，在经红细胞吸附—稀释后，于25000rpm，离心60分钟，即可达到目的。小型病毒如脊髓灰质炎、披膜病毒，则需以35000-45000rpm离心1-2小时。 13、超速离心法：是研究如病毒、细胞核、线粒体、高尔基体、溶酶体和微体，以及各种大分子基本手段。一般认为，转速为10~25Kr/min的离心机称为高速离心机；转速超过25Kr/min，离心力大于89Kｇ者称为超速离心机。目前超速离心机的最高转速可达100Kr/min，离心力超过500Kg。 14、病毒粒子的提纯： 15、病毒的分离培养方法： 动物接种法、鸡胚培养法、细胞培养法 16、实验动物的等级：普通级实验动物（conventional animals, CV）清洁级实验动物（clean animals, CL）无特定病原动物（specific pathogen-free animals, SPF）无菌动物（germ-free animals, GF）悉生动物（gnotobiotic animals, GA） 17、 18、鸡胚接种方式：尿囊腔接种、绒毛尿囊膜接种、卵黄囊接种、羊膜腔接种 19、细胞培养法： ①原代细胞培养: 优点：病毒对天然宿主细胞最敏感。适应于病毒的分离 缺点:有时存在携带潜伏病毒 ②二倍体细胞养优点：细胞碎片少，潜伏病毒容易发现，对病毒的敏感性和原代细胞相似。 缺点：不能无限制的传代下去，并不是所有的细胞都能继代下去。 ③传代细胞系优点：容易培养，生长迅速，易于获得和操作。 缺点：对病毒分离不够敏感，不能用这类细胞培养的病毒制备疫苗。 20、体外细胞培养物的生长类型 ①粘附型细胞:附着在某一固相支持物表面才能生长的细胞。 ②悬浮型细胞:不必附着于固相支持物表面，而在悬浮状态下即可生长的细胞。 21培养细胞的主要形态：上皮样（铺石样）、成纤维细胞样(纹射状)、其它，不定型 22痘病毒科：痘病毒是所有病毒中体积最大、最复杂的一类双股DNA病毒。 共同特点：①砖形病毒，病毒大小在200－400nm，大型病毒 ②病毒含有催化mRNA合成的各种酶