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第章第节 分子生物学方法及其在中医研究中的应用 （每题2分） ．质粒质粒是一类双链、闭环的DNA分子，存在于细菌体中，独立于细菌染色体之外进行复制和遗传的辅助性遗传单位。质粒2．重组载体答案：重组载体采用限制酶切割开载体，采用DNA连接酶将目的DNA片段载体DNA片段重新连接。 ．黏性末端 答案：黏性末端指DNA片段端含有几个的核苷酸单链末端，单链核苷酸碱基DNA片段端DNA片段的核苷酸单链碱基互补配对称为黏性末端。 ．钝性末端 答案：钝性末端指些限制酶在二重对称轴上同时切割DNA的两条链，则产生带平端的DNA片段。 ．限制性核酸内切酶答案：限制性核酸内切酶能特异性地结合于一段该酶能识别的双链DNA序列上切割双链DNA，切割结果可产生黏性末端或钝性末端。 ．DNA聚合酶 答案：DNA聚合酶催化4种脱氧核苷酸合成DNA，催化脱氧核苷酸3’-OH与脱氧核苷酸5’-P之间形成磷酸二酯键反应的。真核细胞有5种DNA聚合酶原核细胞有3种DNA聚合酶。DNA聚合酶I是单链多肽，可催化单链或双链DNA 的延长；DNA聚合酶II则与低分子脱氧核苷酸链的延长有关；DNA聚合酶III在细胞中存在的数目不多，是促进DNA链延长的主要酶。这些酶作用时大多需要模板，合成产物的序列与模板互补。 最常用DNA聚合酶有PCR的Taq酶、大肠杆菌DNA聚合酶I（全酶）和大肠杆菌DNA聚合酶I大片段（Klenow片段）等主要用于催化DNA 体外合成反应。 ．连接酶 答案：连接酶使各具有游离的5’-P和3’-OH的相邻核苷酸之间形成磷酸二酯键，将两段DNA连接起来。最常用的是T4噬菌体连接酶。．脱氧核糖核酸酶I 答案：脱氧核糖核酸酶IDNA酶I为内切核酸酶。它优先从嘧啶核苷酸的位置水解双链或单链DNA。产物为5′端带磷酸基团的单核苷酸及寡核苷酸的混合物。在Mg2+存在下，DNA酶I可独立地存在于每条DNA链且切割位点随机分布。 ．反转录酶 答案：反转录酶能以RNA为模板催化合成互补DNA链。 1．琼脂糖凝胶电泳 答案：琼脂糖凝胶电泳为采用琼脂糖凝胶的水平电泳和鉴定琼脂糖凝胶电泳可分离200bp～50kb的DNA，在溴乙锭染色下，可清晰地辨别少至50ng的DNA，甚至10ngDNA也能辨别得出来。 1．聚丙烯酰胺凝胶电泳 答案：聚丙烯酰胺凝胶电泳为采用聚丙烯酰胺凝胶的电泳，多为垂直电泳和鉴定聚丙烯酰胺凝胶电泳多用于分离5～500bp的DNA，精密到可以分离开仅差一个核苷酸的DNA，常用来测序。 1．RNA制备 答案：RNA制备细胞RNA。RNA制备的方法有多种，比较常用的是制备总RNA一步法。该方法采用强RNA酶抑制剂异硫氰酸胍，抑制RNA的降解，并使RNA与蛋白质分离进入溶液，离心后，RNA选择性地进入无DNA和蛋白质的水相，之后被异丙醇沉淀。操作简便，一次可以分离大量的RNA提取的RNA可用于Northern blot和过Oligo dT柱后者用于分离mRNA。13．Northern blot 答案：Northern blot 即RNA印迹杂交是RNA分析的常用方法。该方法首先RNA分离RNA从凝胶中转移硝酸纤维素膜上，固定用已知DNA或RNA作探针，硝酸纤维素膜上RNA杂交，分析所检测RNA。近似的还有RNA的斑点杂交和狭缝杂交。 1．Southern blot 答案：Southern blot 是DNA印迹杂交，是DNA分析的常用方法。该方法首先一种或多种限制酶消化DNA琼脂糖凝胶电泳把分子量大小不等的DNA分开运用虹吸或电印迹法将DNA转移至硝酸纤维素膜上固定，使DNA牢固地结合在硝酸纤维素膜上与放射性标记或非放射性标记的探针杂交杂交后洗去未被结合的探针进行放射自显影或X光片曝光，在胶片上出现被检测的DNA显影条带也可以用冷CCD照相机直接对杂交膜进行拍照，分析被检测DNA杂交条带。 1．Western blot 答案：Western blot是印迹法是常用的蛋白质定性和定量检测方法。该方法将待测蛋白样品溶解于含有去污剂和还原剂的溶液中，经过SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳后将分子量大小分离的蛋白样品转移到硝酸纤维素膜上，然后将此膜与抗靶蛋白的非标记抗体一同温育，结合上的抗体再与辣根过氧化物酶或碱性磷酸酶偶联的抗免疫球蛋白抗体反应，最后加入酶联抗体生色底物或化学发光底物，在滤膜上抗原抗体结合处原位显示特异性染色蛋白条带，或用X光片曝光，在胶片上出现被检测的蛋白质显影条带也可以用冷CCD照相机对滤膜上的化学发光进行拍照，分析被检测蛋白质显影条带。 1．基因芯片 答案：基因芯片又称基因表达谱芯片（Expression Array），特点是把成千上万个基因高密度地点涂或压印在包被的载体上，一次检测可多达数万个基因。该方法进而发展出外显子芯片（Exon Array），可