实验二培养基配制相关器皿的包扎及消毒灭菌(张理珉).ppt

干热灭菌需要注意的事项 不能对塑料器皿和培养基灭菌； 控制好温度和时间（160~180℃，2小时），防止包扎的报纸焦糊； 灭菌过程（未完全冷下来，60 ℃以下 ）不要打开烘箱门，防止报纸着火或玻璃器皿遇冷爆裂。 四、高压蒸汽灭菌锅的结构及使用 高压蒸汽灭菌的原理 高压蒸汽灭菌器是利用加压的饱和蒸汽（潜热）对物品、器械、药液等灭菌的设备，适用于科学研究、医疗卫生、食品等实验室或工厂使用——造成蛋白质等变性失活。 潜热是指当1g100℃的水蒸汽变成1g100℃水时，释放出2255.2J（1卡=4.184焦耳）的热量。 各种高压蒸汽灭菌器之间的区别只在于自动化程度的高低（水位控制、温度恒定控制、时间控制、自动排放冷空气、程序化显示） 饱和蒸汽压压力指示温度 直接利用温度探测器指示温度 典型的高压蒸汽灭菌锅纵剖面结构 压力调节器 安全阀 排气口 控制柄 记录仪 门垫圈 放电器 蒸汽阀 蒸汽夹层 阻板 蒸汽供给 蒸汽供应阀 温度感应器 蒸汽凝汽瓣 废汽冷凝器 蒸汽通入夹层 蒸汽由夹层到灭菌室 夹层冷凝水收集口 蒸汽由夹层进入灭菌室和蒸汽排出口 卧式灭菌锅示意图（简图） 蒸汽进口 灭菌过程出气口（冷空气和蒸汽） 灭菌时间到排汽口 压力表 蒸汽排气阀 温度计阀 蒸汽供应阀 门 消毒室 夹套（层） 立式压力灭菌器 手提式灭菌锅 卧式矩型和圆型压力蒸汽消毒器 高压蒸汽灭菌过程： 1、取出内筒，检查水位； 2、加水至淹过电发热管和内筒支架； 3、放入内筒，并在其中放入需灭菌物品（要求松散）； 4、加盖（对称旋紧），打开放汽阀； 5、加热（有内外两种），升温； 6、排除冷空气——由放汽阀冒汽3~5分钟； 7、关闭放汽阀（有些灭菌锅灭菌过程中一直保持较小排气或到一定温度自动关闭） ，加压升温至所需温度或压力； 8、保温定时至所需时间； 9、不再加热，降温至压力表为“0”，打开放汽阀； 10、开盖取物（注意蒸汽烫伤）。 空气排除度对灭菌温度的影响 压力表读数 锅内温度（℃） kg/cm2 磅/吋2 MPa 饱和蒸汽 排除1/2空气 不排除空气 0.35 5 0.031 108.8 94 72 0.70 11 0.076 115.6 110 90 1.05 15 0.108 121.3 112 100 1.40 20 0.142 126.2 118 109 1.75 25 0.172 130.0 124 115 2.10 30 0.213 134.6 128 121 一些细菌芽孢湿热灭菌所需时间 消毒、灭菌的生物指示菌 嗜热脂肪芽孢杆菌 （Bacillus stearothermophilus） 结核分枝杆菌——致病菌指示菌 （Mycobacterium tuberculosis 沙门氏菌——致病菌指示菌（通用检测） （Salmonella spp） 高压蒸汽灭菌效果的监测方法（3种） 1、工艺（程序）监测——压力表、温度计等，最常见，每次都使用； 2、化学指示监测 ——特定化合物熔点（熔化前后晶体形态不同，硫磺熔点115℃、乙酰替苯胺116℃、脱水琥珀酸120℃、苯甲酸122.4℃等结晶 ）、灭菌指示胶带（变色反应）； 3、生物指示剂监测 ——特定微生物（需经培养）。 五、实验室常用灭菌方法 1、高压蒸汽灭菌——常用121.3℃，20min和115℃，10min两种条件进行；适用于耐热性溶液、培养基、水和高糖、高蛋白质培养基的灭菌； 2、热空气干热灭菌——160~170℃，2hr；适用于玻璃器皿和金属工具的灭菌； 3、灼烧灭菌——酒精灯和电加热，适用于接种工具的灭菌； 4、过滤除菌——现在一般使用微孔滤膜（0.22μm或0.45μm），适用于非耐热性溶液和培养基的过滤除菌。 实 验 内 容 三相关器皿的包扎方法 一、器皿包扎的作用 1、湿热灭菌时防止冷凝水的污染； 2、灭菌后可以长期放置，保持器皿等的无菌状态和防止灰尘的污染。 二、相关器皿的包扎要求 利用报纸、牛皮纸或专用器械包扎，重点练习报纸包扎。 1、培养皿的包扎 ——双层大报纸、12套包扎成1包。 2、吸管的的包扎 ——吸管先塞棉花（松紧适度），利用宽5cm左右的长条形报纸裹扎。 3、试管和三角瓶的包扎 4、涂布器 （刮子）的包扎 三、包扎中的几点说明 包扎纸大小适中，器皿或器材不外露，塞子、纱（棉）布、瓶口、管口等不外露。 包扎试管和三角瓶时，包扎线向下一点，不要扎在塞子上。 装有培养基等液体的容器，包扎过程或包扎好后不要倒置（包括水平放置），以免造成污染（塞子）和内装液体不准。 四、利用吸管筒（铜制或不锈钢制）包扎吸管灭菌 不锈钢吸管筒、培养皿筒 本次实验完成的内容 1、90mL无菌水1瓶（250mL三角瓶，内加玻璃珠） 2、9mL无菌水6支（18×180试管）