实验５蚕豆根尖细胞微核检测技术.ppt

* 实验５ 蚕豆根尖细胞微核检测技术 一 原理 二 目的 学习蚕豆根尖细胞微核制片与检测技术，了解该技术在诱变作用检测上的应用。 微核(Micronucleus,MCN)，也叫卫星核，是真核生物细胞中的一种异常结构，是染色体畸变在间期细胞中的一种表现形式。微核是各种理化因子，如辐射，化学药剂对分裂细胞作用产生的。在细胞间期，微核呈圆形或椭圆形，游离于主核之外，大小应在主核1/3以下。其折光率及细胞化学反应性质与主核一样，也具有合成DNA的能力。 一般认为微核是有丝分裂后期丧失着丝粒的染色体断片产生的。这些断片或染色体在分裂过程中行动滞后，在分裂末期不能进入主核，便形成了主核之外的核块。当子细胞进入下一次分裂间期时，它们便浓缩成主核之外的小核，即形成了微核。微核率的多少与和作用因子的剂量或辐射累积效应有正相关。 微核测试用于辐射损伤、辐射保护、化学诱变剂、新药试验、食品添加剂的安全评价，以及染色体遗传疾病和癌症前期诊断。 三 材料 蚕豆根尖（新鲜的固定材料） 四 步骤 1 蚕豆浸种催芽 2 待测液对根尖的处理 3 根尖细胞的恢复培养 4 根尖的固定 5 根尖的酸水解：将固定的幼根放入青霉素瓶中，用dH 2 O 浸洗2次，除去水后加入5N HCL 将幼根泡住，放入30OC水浴中水解28 min 左右（水解时间与水温有反相关关系），待幼根软化（同时变为半透明）即可取出，用dH 2 O 浸洗幼根2次，5min/次。 6 制片：将幼根放在擦净的载片上，用解剖针截下4mm左右的根尖部分，捣碎，加入1-2滴改良苯酚品红染色液，染色10分钟左右，然后加盖片，压片。 7 镜检：先在低倍镜下找出具微核的细胞，再转入高倍镜进行仔细观察。 五 作业 绘出一个具微核的蚕豆根尖细胞图。 附微核识别标准： 1、凡是主核大小的1/3以下，并与主核分离的小核； 2、小核着色与主核相当或稍浅； 3、小核形态可为圆形，椭圆形，不规则形等。 凡符合以上3条的小核就是微核（micronucleus,MN) 微核形成机制： 附：实验数据的处理和污染程度的划分 将微核观察记录于表上 微核千分率（MN%o)平均值 总计 各次观察的细胞数与微核数 微核数/细胞数 镜检者 镜检日期 片号 1）各测试样品（包括对照组）微核千分率（MN‰) 的计算为： MN‰=某测试样点（或对照）观察到的微核数/某测试样点（或对照）观察的细胞数） MN‰ 在10‰以下的为基本污染 10‰ - 18 ‰ 区间为轻度污染 18 ‰ - 30 ‰区间为中度污染 30 ‰以上为严重污染 注：每个处理观察3个根尖，每个根尖记数1000个细胞，统计其中含微核的细胞数然后平均，即为该处理的微核千分率。 2）污染指数（pollution index) 污染指数（PI)=样品实测MN‰ 平均值/标准水MN‰ 平均值 PI在 0- 1.5 区间为基本无污染 1.5-2.0区间为轻度污染 2.0-3.5区间为中度污染 3.5以上为严重污染 注：1）对严重污染的水环境，监查处理时造成根尖死亡，应稀释后再做测试； 2）如RT 35℃，MN本底会增高，但可经污染指数数据处理，不会影响监测结果。 In an individual heterozygous for a paracentric inversion, the chromosomes form an inversion loop during pairing in prophase I. 后期Ⅰ染色体桥 后期Ⅰ染色体桥和染色体断片 二分体时期微核 倒位的细胞学特征： 粗线期倒位圈；后期桥和断片；微核 倒位的遗传效应： 改变重组率；基因重排 微核试验自70 年代初产生以来的近30 年的时间里,在环境物质遗传毒理检测方面发挥了重要的作用。它以经济、简便、快速、敏感、特异、准确等特点,已成为检测染色体损害的致突变剂和环境污染物的快速初筛试验,已广泛用于筛检具有染色体损伤作用的致突变剂(Mutagens) 和环境污染物( Environmental Pollutants) 。 　 微核(micronucleus ,MN) 是指位于生物细胞的细胞质中独立于主核,直径小于主核1/ 20～1/ 3 ,完全与主核分开的圆形或椭圆形的微小核。它可以是整条染色体,也可以是染色体断片,染色性与主核一致,其中部分微核具有DNA 复制能力。微核是由于外界损害因素使染色体发生断裂,细胞进入下一次分裂时,染色体不能随有丝分裂进入子细胞,而导致染色体丢失或断裂, 从而形成一个或数个小核. 微核试验的产生与发展