丙二醛的测定.doc

贵州大学 植物生理学综合性实验报告 题目：逆境对玉米生长的影响（丙二醛的测定） 学院：生命科学学院 专业：生物科学类 班级：生物102 学号：1007040161 姓名：袁晓玲 指导老师：罗睿 2012-6-21 题目：逆境对玉米生长的影响（丙二醛的测定） 前期处理： 在苗期对玉米进行处理，一共有四盆玉米苗，标号为A、B、C和D。其中A为对照组，不做任何处理，只是每天浇25mL自来水；B盆：向其中喷洒草酸溶液；C盆：向其中喷洒氢氧化钾溶液；D盆：向其中喷洒氯化钠溶液；B、C和D盆中喷洒的溶液浓度均为0.1mol/L，并且每天喷洒25mL。 这样处理四天后，测量各个盆里玉米叶片的丙二醛的含量。 二、丙二醛含量的测定 实验目的 熟悉测定丙二醛（MDA）含量的常用的方法。 2、实验原理 植物器官在逆境条件下或衰老时，往往发生膜脂过氧化作用，丙二醛（MDA）是其产物之一，通常将其作为脂质过氧化指标，用于表示细胞膜脂过氧化程度和植物对逆境条件反应的强弱。 在酸碱和盐环境条件下，丙二醛可与巴比妥酸（TBA）反应生成红棕色的3，5,5—三甲基噁唑—2,4—二酮，在532nm处有最大吸收波长。但该反应会受到可溶性糖的极大干扰，糖与TBA的反应产物在532nm处也有吸收，但其最大的吸收波长在450处。 采用双组分分光光度计法可分别求出MDA和可溶性糖的含量。该法针对混合液中的两个组分，它们的光谱吸收峰虽有明显的差异，但吸收曲线彼此又有些重叠，可根据Lambert—Beer定律，通过代数方法，计算出一种组分由于另一种组分存在时对OD值的影响，最后分别得到两种组分的含量。 3、器材与试剂 （1）实验仪器：分光光度计、研磨器、恒温水浴、试管、量筒、烧杯。 （2）实验试剂：三氯乙酸、石英砂、硫代巴比妥酸（TBA）溶液（用10%TCA配制0.6%的TBA溶液）。 （3）实验材料：盆栽玉米。 4、实验步骤 MDA的提取：取各个盆中玉米的叶片1g将其剪碎，加入10%三氯乙酸（TCA）2mL和少量石英砂，研磨；进一步加入8mLTCA充分研磨，将匀浆液倒入试管中，静置20分钟，然后提取上清液，上清液即为样品提取液。 显色反应及测定：吸取2mL提取液，加入2mL0.6%TBA液，混匀，置于沸水浴中沸煮15min，迅速冷却，静置。取上清液测定532nm和450nm处的OD值。对照管以2mL水代替提取液。 计算：根据Lambert—Beer定律，（以蔗糖为例）得 C1=0.01171A450 C2=6.45×10-6 ×A532—0.56×10-6×A450 式中 C1为蔗糖与TBA反应产物的浓度，单位是mol/L；C2为MDA与TBA反应产物的浓度，单位是mol/L。 5、实验结果 ①各个组所在不同波长下测得的OD值： 编号 C1（mol/L） C2（mol/L） A（对照组） 3.42×10-3 1.443×10-6 B（加入草酸） 4.25×10-3 1.383×10-6 C（加入氢氧化钾） 5.67×10-3 2.522×10-6 D（加入氯化钠） 5.41×10-3 2.412×10-6 编号 OD值（532nm） OD值（450） A（对照组） 0.249 0.292 B（加入草酸） 0.246 0.363 C（加入氢氧化钾） 0.433 0.484 D（加入氯化钠） 0.414 0.462 ②根据各个组在不同波长下测得的OD值分别算出蔗糖和MDA分别于TBA反应产物的浓度C1和C2： 结果分析 （1）处理期玉米的变化：刚喷洒各种试剂时，玉米苗并没有立即死亡，两天以后才开始有根腐烂的情况出现，并且在此期间，玉米苗很纤细，叶片逐渐变黄，萎蔫。 原因：植物在受到逆境胁迫表现出受到损伤的现象之前，植物会对逆境胁迫做出适应性的调节反应，在喷洒的浓度不是很大，量不是很多的情况下，并不会马上表现出受损现象，然而随着喷洒的时间增多，最终还是会经受不住而出现了受损的现象，根逐渐开始腐烂，叶片变黄，开始萎蔫。此外，叶