木薯粉酒精发酵实验报告详细篇.docVIP

实验报告 实验目的 掌握木薯分酒精发酵的基本过程与主要参数的测定方法。 熟悉基本仪器的工作原理和使用方法 二、实验原理 酒精发酵是在厌氧条件下，己糖分解为乙醇并释放出二氧化碳。酒精发酵的类型有3种：即通过EMP途径的酵母菌酒精发酵、通过HMP途径的细菌酒精发酵和通过ED途径的细菌酒精发酵酵母菌通过EMP途径分解己糖生成丙酮酸，在厌氧条件和微酸性下，丙酮酸则继续分解为乙醇。 淀粉类原料的酒精发酵主要有先糖化后发酵工艺和边糖化变发酵工艺（即同步糖化发酵工艺）2种，前者发酵时间长、酒精浓度低；后者发酵时间短，酒精浓度高，而且由于没有终产物抑制，糖化酶用量也较少，因此该工艺是酒精发酵研究的重要方向之一。本实验即采用的是同步糖化发酵工艺。 液化酶即ɑ-淀粉酶，可将淀粉液化成糊精及少量麦芽糖和葡萄糖。 糖化酶是一种淀粉外切酶，能把淀粉从非还原性未端水解a-1.4葡萄糖苷键产生葡萄糖，也能缓慢水解a-1.6葡萄糖苷键，转化为葡萄糖。同时也能水解糊精，糖原的非还原末端释放β-D-葡萄糖。1、菌种 酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）GGSF16 2、培养基 斜面菌种保藏培养基：葡萄糖20g/L,酵母浸膏10g/L，蛋白胨20g/L，琼脂20g/L，加水溶解，自然pH，于121℃下蒸汽灭菌30min。 一级种子培养基：葡萄糖20g/L,酵母浸膏10g/L，蛋白胨20g/L，自然pH，于121℃下蒸汽灭菌30min。 二级种子培养基：葡萄糖20g/L,酵母浸膏10g/L，蛋白胨20g/L，pH值自然，于121℃下蒸汽灭菌30min。 发酵培养基：量取初始全渣总糖浓度291.48g/L和滤液总糖浓度295.57g/L的木薯粉浆液ml，接种前加入用过滤膜过滤的尿素溶液，添加量为3.0g/L。 3、主要仪器 标准筛40目、立式压力蒸汽灭菌器、低速台式大容量离心机、全温度恒温调速摇瓶柜、台式冷冻离心机、生物传感分析仪SBA-40C、分光光度计、酸度计、漩涡混合器、Motic数码生物镜、灭菌锅、3000ml三角瓶2个、500ml三角瓶11个、万用电炉、0.5-10ul移液枪、100-1000ul移液枪、1000-5000ul移液枪、酸式滴定管25ml。 4、溶液及试剂 菲林甲液（CuSO4·5H2O）：称取69.3g CuSO4·5H2O，加入蒸馏水定容至1000ml； 菲林乙液：（C4O6H4KNa）：称取346.0g C4O6H4KNa和100.0gNaOH，加入蒸馏水定容至1000ml； 2.5g/L的标准葡萄糖溶液：称取在102℃左右条件下，烘烤4h的葡萄糖2.5g（精确至0.0002g）加入蒸馏水定容至1000ml，12h之后可以使用； 2mol/L HCl溶液：浓盐酸5.6mL，定容100mL容量瓶中HCl溶液：浓盐酸mL，加入蒸馏水定容00mL容量瓶中g/LNaOH溶液：氢氧化钠定容于00mL容量瓶中mol/L NaOH溶液：氢氧化钠定容于0mL容量瓶中定容于00mL容量瓶中称取过40目筛的木薯粉以料水比1：2的比例60℃的水，按10U/g木薯粉的加入，搅拌混匀后60℃下保温min并不停搅拌。迅速升温到℃，保温液化h，期间不停搅拌，尽量不要让木薯粉浓醪中的固体颗粒粘连于容器壁上。然后降温至50-60℃，取10ml全渣液备用测总糖，将液化后的全渣液过滤，制的滤液测总糖。根据测得滤液的总糖浓度调滤液的总糖浓度至270g/L，于121℃下灭菌30min，然后冷却至33℃左右。按250U/g木薯粉的加入糖化酶。按接种量为10％接种酿酒酵母GGSF16至液化糖化后的醪液中，初总糖初还原糖33℃发酵，转速为10r/min，摇床培养72h，期间每隔6h取样分析。测定 图4-1木薯粉酒精发酵工艺流程图 Fig.4-1 the process flow diagram of cassawa starch ethanol fermentation  五、实验检测方法 1、测总糖 (1)原理 本次试验采用的测总糖的方法是斐林试剂质量分数为0.05 g/m质量分数为0.1 g/m试样制备称取10mL试样于250mL三角瓶中，加70mL水和20mL质量分数为20%的HCl溶液，沸水浴中水解60min，冰水迅速冷却，以200g/L的NaOH溶液中和到微酸性，定容到250mL，滤液备用。斐林试剂所消耗葡萄糖标准溶液的体积预备试验： 吸取林甲液、乙液及标准葡萄糖液各5mL于250mL三角瓶内，加20mL水，摇匀，在电炉上加热沸腾，加入溶液2滴，在沸腾状态下1min内用标准葡萄糖液滴定至蓝色消失为止。记录标准葡萄糖液消耗的总体积。 正式试验：吸取林甲液、乙液及标准葡萄糖液各5mL于250mL三角瓶内，加水20mL