无公害锯缘青蟹第1部分苗种生产技术规范.docVIP

前 言 本标准附录A为资料性附录。 本标准由浙江省海洋与渔业局提出并归口。 本标准起草单位：浙江省水产质量检测中心。 本标准主要起草人：张海琪、何中央、王扬、郑重莺、丁雪燕、应永飞。 水产品中硝基呋喃类代谢物残留量的测定 ——液相色谱-串联质谱法 范围 本标准规定了水产品中呋喃它酮的代谢物5-甲基吗啉-3-氨基-2-噁唑烷基酮（简称AMOZ，下同）、呋喃西林的代谢物氨基脲（简称SEM，下同）、呋喃妥因的代谢物1-氨基-2-内酰脲（简称AHD，下同）和呋喃唑酮的代谢物3-氨基-2-噁唑烷基酮（简称AOZ，下同）残留量的液相色谱-串联质谱的测定方法。 本标准适用于水产品中呋喃它酮代谢物、呋喃西林代谢物、呋喃妥因代谢物和呋喃唑酮代谢物残留量的检验。 本标准规定呋喃它酮代谢物、呋喃西林代谢物、呋喃妥因代谢物和呋喃唑酮代谢物的检测限均为0.50 μg/kg。 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的必威体育精装版版本。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本适用于本标准。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 原理 样品中残留的硝基呋喃类抗生素代谢物在酸性条件下水解，用2-硝基苯甲醛衍生化，经固相萃取柱净化后液相色谱-串联质谱法测定，内标法定量。 试剂 除非另有说明，仅使用分析纯试剂。 水：GB/T 6682规定的一级水。 甲醇：色谱纯。 乙腈：色谱纯。 乙酸乙酯：色谱纯。 磷酸氢二钾。 甲酸：优级纯。 二甲亚砜：优级纯。 盐酸：优级纯。 氢氧化钠：优级纯。 2-硝基苯甲醛（2-NBA）：纯度≥99%。 磷酸氢二钾溶液：0.5 mol/L。称取5.7 g磷酸氢二钾（4.5），用水溶解，定容至50 mL。 盐酸溶液：0.2 mol/L。量取17 mL浓盐酸（4.8）用水定容至1 000 mL。 氢氧化钠溶液：1 mol/L。称取40 g氢氧化钠(4.9)，用水溶解，定容至1 000 mL。 2-硝基苯甲醛溶液：8.0 g/L。称取80 mg 2-硝基苯甲醛（4.10）溶于10 mL二甲亚砜(4.7)，临用前配制。 Oasis HLB固相萃取柱或相当者：60 mg，3 mL。使用前分别用3 mL乙酸乙酯、3 mL甲醇和5 mL水预处理，保持柱体湿润。 AMOZ、SEM、AHD、AOZ及同位素内标物AOZ-D4、AMOZ-D5、AHD-D3和SCA-13C-15N2标准物质：纯度≥98%。 标准储备溶液：0.10 mg/mL。准确称取四种硝基呋喃类代谢物标准物质及四种相应的同位素内标物，分别用甲醇配成0.10 mg/mL的标准贮备溶液。-18℃避光保存，保存期为三个月。 混合标准储备溶液：1 μg/mL。吸取四种硝基呋喃类代谢物标准储备溶液（4.17），用甲醇配成1 μg/mL。-18℃避光保存，保存期为三个月，使用前回温到室温。 混合内标工作溶液：100 ng/mL。吸取四种硝基呋喃类代谢物同位素的标准储备溶液（4.17），用甲醇配成100 ng/mL。-18℃避光保存，保存期为三个月，使用前回温到室温。 混合标准工作溶液：根据需要，临用前吸取一定量的混合标准储备溶液（4.18），用甲醇稀释配制适当浓度的混合标准工作液。 仪器和设备 液相色谱串联四极杆质谱仪，配有电喷雾（ESI）离子源。 恒温振荡器。 固相萃取装置。 高速台式离心机：5 000 r/min。 氮气吹干仪。 pH计。 测定步骤 提取 称取10 g均质试样（精确到0.01 g）于50 mL聚丙烯离心管中，加入100 μL内标工作溶液（4.23），分别加入25 mL 0.2 mol/L盐酸溶液和0.5 mL衍生剂（4.14），涡旋混合1 min，置于37℃恒温振荡器中保持16h。 净化 将上述提取溶液（6.1）取出放置至室温，加入1 mL 0.5 mol/L磷酸氢二钾溶液（4.11），用1 mol/L 氢氧化钠溶液（4.9）调节溶液pH范围至7.0～7.4，以4 500 r/min的速度离心15 min，上清液过已Oasis HLB或相当的固相萃取柱（4.15），调节流速小于等于2 mL/min，待样液全部通过固相萃取柱后用3 mL水洗固相萃取柱，弃去全部流出液。负压下抽干固相萃取柱10 min，再用6mL乙酸乙酯洗脱被测物，洗脱液全部收集于10 mL离心管中，并在氮气吹干仪上40℃水浴吹干，1mL乙腈与0.4%甲酸水溶液（10+90）溶解残渣，过0.2 μm滤膜，滤液供液相色谱-串联质谱测定。 测定 色谱条件 色谱柱：Zorbax XDB C18柱（150 mm×2.1 mm×5 μm）或相当者；