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荧光光谱分析仪 分析测试中心 陈仕云 PF8500 荧光光谱仪的操作 开机：插上电源插头，打开仪器power，再打开电脑。 双击桌面“SpectraManger”，打开测试软件，双击Spectra Measurement。 点击Search Maximun 进行 Ex、Em 的最大波长扫描（最大波长扫描时 Ex、Em 灯打开）。 PF8500 荧光光谱仪的操作 单击“Measure”菜单中“Paramenters”，进行参数设置，测量Em：固定Ex，起始波长与Ex相差10-20nm波长，终止波长不作要求；测量Ex：固定Em，终止波长小于Em，起始波长不作要求；参数设置好后点ok，设置完毕。 关闭“Ex”、“Em”，点击“auto zero”进行调零。 PF8500 荧光光谱仪的操作 打开“Ex、Em”，点“S”进行样品测试。 点击“File”菜单中“Export”保存“txt”文件。 关机：先关测试软件和电脑，再关仪器。 荧光光谱仪的使用与维护 严格按照仪器规定的操作步骤进行操作。 电源：电压、电流、电源的稳定须符合仪器规定。 光源：需预热20min，灯及其窗口要保持清洁。 单色器：应注意防潮、防尘、防污和防机械损伤。 光电倍增管：加高压时切不可受外来光线直接照射。 样品池：使用时应同一个方向插放，不能经常磨擦。 荧光光谱仪的使用与维护 放入样品后注意关闭样品仓盖，避免入射光露出样品仓。 样品检测完毕后，需要对样品进行专门的回收处理，不得随意倒入水池中，避免污染环境，造成对自己和他人健康的危害。 荧光光谱仪的故障排除 仪器出现故障，必须请专门人员进行检修。 安全防护：操作者不能直视光源，以免紫外线损伤眼睛。 遇到突发事件，要先关仪器，再关电闸。 七、荧光光谱仪的临床应用 七、荧光光谱仪的临床应用 七、荧光光谱仪的临床应用 七、荧光光谱仪的临床应用 七、荧光光谱仪的临床应用 七、荧光光谱仪的临床应用 七、荧光光谱仪的临床应用 七、荧光光谱仪的临床应用 七、荧光光谱仪的临床应用 七、荧光光谱仪的临床应用 第二节 原子光谱分析仪 一、概 述 原子光谱分析仪的特点 优点：分析速度快、操作简便、选择性好、灵敏度高、测定范围广、试剂用量少等，可同时测定多种元素，不必进行复杂的分离处理。 缺点：对温度、pH值等因素变化比较敏感；应用范围较窄，只能用来测量发荧光的物质，或与某些试剂作用后发荧光的物质。 * 分子荧光光谱仪 A 原子荧光光谱仪 B 第一节 荧光光谱分析仪 一、概 述 荧光：某些物质吸收光能量后，可发射波长与激发光波长相同或不同的光，当激发光源停止照射试样时，再发射过程立即停止，这种再发射的光称为荧光（fluorescence）。荧光包括分子荧光和原子荧光。 荧光分析法：通过测定物质分子产生的荧光强度进行物质的定性与定量分析的方法。 荧光光谱仪：采用荧光分析法来测量的仪器。 一、概 述 荧光产生机制 物质的分子吸收了照射光的能量后，处于基态最低能级的分子被激发到电子激发态的各个振动能级。被激发的分子与周围的分子碰撞，并把部分能量以热能的形式传给周围的分子，自己降落到单线第二电子激发态的最低振动能级。然后，由此最低振动能级向基态的各个振动能级跃迁，同时以发光的形式释放出其能量。这种光即为荧光。 一、概 述 1.振动弛豫 2.内转换 3.猝灭 4.系间跨越 s单重态 T多重态 ?1 ,?2激发波长; 荧光 ?3磷光 分子去活化过程及荧光产生示意图 一、概 述 荧光分析的特点 优点：灵敏度高（可达10～12g数量级）；选择性强，有利于分析复杂的多组分混合物；用样量少、特异性好、操作简便。 缺点：对温度、pH值等因素变化比较敏感；应用范围较窄，只能用来测量发荧光的物质，或与某些试剂作用后发荧光的物质。 二、荧光分析的基本原理 （一）激发光谱和荧光光谱 任何发射荧光的物质都具有两个特征光谱，即激发光谱（excitation spectrum）和荧光光谱(fluorescence spectrum)。 激发光谱和荧光光谱是荧光分析中定性和定量的基础。 激发光谱：连续改变激发光波长，固定荧光发射波长，测定不同波长的激发光照射下，物质溶液发射的荧光强度的变化。 以激发光波长为横坐标，荧光强度为纵坐标作图，即可得到荧光物质 的激发光谱。 从激发光谱图上可找到 发生荧光强度最强的 激发波长λex。 荧光光谱：用λex作激发光源，并固定强度，测定不同波长的荧光强度。 以荧光波长为横坐标，荧光强度为纵坐标作图，便得荧光光谱。荧光强度最强的波长为λem 。 荧光物质的λex和λem 是鉴定物质的依据，也 是定量测定中所选用的 最灵敏的波长。 （