7.鱼血红细胞计数和白细胞分类计数.ppt

生理学实验 实验内容 1、鱼类的红细胞计数 2、鱼类的白细胞分类计数 本次实验课在A409室进行。 一、红细胞计数 （一）实验原理 1. 鱼类的红细胞数与鱼类的呼吸生理密切联系，也与鱼的营养、健康和疾病等方面有关。红细胞数的计算，通常是用血液混合管先把试样稀释100～200倍，使用纽鲍尔（Neubauer）计数板等，以每立方毫米血液中的数量表示。在一般情况下，因为白细胞数要比红细胞数少很多，因此即使把白细胞计算在内也不会有多大的误差。 2. 实验方法学 按一定比例稀释红细胞后，将此稀释液滴加少许到有刻度的载玻片（计数池）上，在显微镜下数细胞的个数，最后得出（统计）单位体积中红细胞的数量。 红细胞数因鱼种而异。根据已有的资料，硬骨鱼类的红细胞数一般在100～300万/mm3。（白细胞数7000～400000/mm3） 血细胞计数板的构造 正面图； B. 纵切面图： 1、血细胞计数板；2、盖玻片；3、计数室 计数室 （9个大方格） 中央大方格 中方格 小方格 （二）实验动物 鲫鱼或鲤鱼 （四）实验中的关键步骤 1. 从动物取血（具体方法见后） （三）实验用药品 红细胞稀释液 NaCl（维持渗透压）0.5g Na2SO4（使溶液比重增加，红细胞均匀分布，不易下沉）2.5g HgCl2（固定红细胞并防腐）0.25g 蒸馏水 加至100ml 2. 准确吸取血液量： 用中指和拇指捏住沙利氏吸管的橡皮囊，食指堵住囊上小孔，刻度朝向操作者，将吸血管倾斜，管口浸入血滴中，缓缓放松橡皮囊，将血吸到20mm3处。然后先松食指，再松拇指和中指，这样血液就不会进入橡皮囊。用干棉球擦净管外的血液，如吸入血液超过刻度，可用左手指轻触管口数次，沾去多余的血液，动作要快，以防凝血。 3．吸管洗涤法 弃去吸管内的血液稀释液，用蒸馏水洗三次，95%酒精洗二次，以洗去管内水分，再用乙醚洗二次。 如吸管内存有血凝块，可置于 1% 氨水中浸泡，待血块溶解脱落后，再用流水清洗，并按上述步骤清洗。 4. 计数 血液稀释溶液滴入计数室后，须静置2～3分钟然后在显微镜低倍镜下计数。计数红细胞时，数中央大方格四角的四个中方格和中央的一个中方格的红细胞总数。 这样把5个中方格内数得的红细胞总数乘以10，000（200×50），即得每立方毫米血液内的红细胞总数。 数上不数下，数左不数右。 二、白细胞的形态与分类计数 熟悉血液涂片的制作和染色技术，了解白细胞的形态结构。 （一）各类血细胞的形态 单核细胞 单核细胞 单核细胞 淋巴细胞 淋巴细胞 中性粒细胞 中性粒细胞 嗜酸性粒细胞 嗜酸性粒细胞 中性粒细胞 嗜碱性粒细胞 各类血细胞（wright 染色） 白细胞的形态 ( wright 染色 ) 1、嗜中性粒细胞： 核染成深的蓝紫色，分成2-4叶 (鱼的核分叶少或不分叶，胞核呈球形，偏于细胞的一端）。细胞质中有大量细小颗粒，染成粉红色。 2、嗜酸性粒细胞 较嗜中性粒细胞约大，细胞质中充满粗大嗜酸性颗粒，染成橘（砖）红色。核多分为两叶，略偏于细胞一侧。 3、嗜碱性粒细胞： 较中性粒细胞约小，核在细胞中央，通常呈S形(或分叶)，着色浅。细胞质内含嗜碱性颗粒，染成深蓝紫色。 嗜碱性粒细胞 小淋巴细胞 4、淋巴细胞： 小淋巴细胞最多。细胞核呈圆形或卵圆形，核的一侧有时可看到一凹痕，核很大，占细胞的大部分，被染成深蓝紫色。细胞质少，在核周围仅有薄层，染成蓝色。 中淋巴细胞 大淋巴细胞 单核细胞 5、单核细胞： 细胞质比淋巴细胞丰富（与大淋巴细胞相比），细胞核呈肾形或马蹄形，着色较淡，呈网状结构，核多偏于细胞的一侧，染成紫蓝色。细胞质染成浅灰（蓝）色，胞质中有小的液泡和少量的嗜天青颗粒。细胞表面伸出许多伪足 （细胞轮廓不规则）。细胞较大。 白细胞 南方鲶的血液涂片（Wright 染色） 单核细胞 嗜中性粒细胞 红细胞 鲤鱼的血细胞 秉志著《鲤鱼组织》科学出版社 1983 单核细胞？ 大淋巴细胞 嗜中性粒细胞？ 小淋巴细胞？ （二）涂片染色 1、血液涂片 （1） 载玻片 一般将载玻片先用洗衣粉水溶液煮沸20分钟，又由流水冲洗，再经清洁液浸泡并翻动，约过12小时或过夜，用流水反复冲洗，最后入95％酒精浸泡约1小时。取出，以洁净布巾夹持玻片边缘擦干备用。 （2） 采血与涂片 由玻片一端承接约3mm直径的血滴，将此玻片1保持水平。速取另一边缘平整的洁净载玻片2，将其前端放在血滴前，与片1保持约45o角并稍向后移与