《环境生物学》 第4章环境污染生物监测6专用课件.ppt

二、大肠杆菌群的测定： 特征 定义：一群需氧或兼性厌氧性的G-无芽孢杆菌，能在37oC 培养24h使乳糖发酵产酸产气。包括了粪便内全部兼性需 氧性的G-杆菌，以大肠杆菌埃希氏菌属为主，尚有 柠檬酸杆菌属、肠杆菌属、克雷伯氏菌属等。 成人每日粪便中排出的菌数可达(5~100)×106个。 （一）水质的细菌学检验 第2节 水体污染生物监测 常用多管发酵法与滤膜法： 1、发酵法： 又称多管发酵法或三步发酵法 1）初发酵（推测试验）：将不同稀释度的水样，分别接种于含有乳糖等糖类的培养液中（3倍或1倍乳糖液），经37oC培养24hr，观察产酸产气情况，以初步判断是否有大肠菌群存在。 二、大肠杆菌群的测定： （一）水质的细菌学检验 第2节 水体污染生物监测 2）平皿分离（证实试验） 水中除大肠菌群外，尚有其它细菌可能引起糖类发酵，因此需要进一步证实。 将初发酵管中已发酵的菌液接种于伊红美兰培养基上，37oC培养24hr， 根据菌落特征，挑取可能为大肠菌群的菌落制片，经革兰氏染色，进一步证实是否为大肠菌群。 二、大肠杆菌群的测定： （一）水质的细菌学检验 第2节 水体污染生物监测 3） 复发酵试验（完成试验） 将上述可能为大肠菌群的菌落再次转接入1倍乳糖培养液中，经37oC培养24hr，产酸产气者即最后确证为存在大肠菌群。 产酸、产气分别记为阳性反应，不产酸、产气则记为阴性反应； 根据阳性管数量，查表求得水体大肠菌群的数量。 二、大肠杆菌群的测定： （一）水质的细菌学检验 第2节 水体污染生物监测 2 滤膜法 发酵法全部检测需要的时间较长，为缩短时间，可以采用滤膜法，其步骤为： 1）水样过滤：选用具有微孔的滤膜，灭菌后通过抽滤一定量的待测水样，将水中的细菌截留在无菌滤膜上； 2）培养：将滤膜有菌面朝上贴于特定的固体培养基平板上（伊红美兰培养基），经37oC培养16hr~18hr； 第2节 水体污染生物监测 （一）水质的细菌学检验 3）结果观察： 培养16hr~18hr后，挑选深红色或紫红色、不带或带有金属光泽的菌落，进行革兰氏染色观察，确定大肠菌群细菌。 G- ：接入乳糖培养液中，复发酵； G+：阴性结果。 经染色证实为G-无芽孢杆菌者，再接入乳糖蛋白胨半固体培养基中，37oC培养6~8hr，产气者判定为大肠菌群阳性。 2 滤膜法 第2节 水体污染生物监测 （一）水质的细菌学检验 4）结果计算： 根据滤膜上证实的大肠菌群数及滤过水量，求出1L水中的大肠菌群数量。 计算公式： 总大肠菌群数 = 滤膜上的菌落数以20~60个/片为适宜。 5）评价报告： 根据测定的数值写出检测水样的细菌学检测结果，予以评价。 滤膜上生长菌落数 × 1000 过滤水样量（mL） 第2节 水体污染生物监测 （一）水质的细菌学检验 滤膜法的优点： 省时、省料、设备要求低； 可以采集较多的检验水样。 局限性： 易受悬浮物干扰； 受其它细菌的干扰； 受水样中毒物的干扰。 第2节 水体污染生物监测 （一）水质的细菌学检验 （二）浮游生物监测 浮游植物：以单细胞、群体或丝状体的形式出现 浮游动物：原生动物、轮虫、枝角类 和桡足类等 浮游生物是指具有很少或没有克服水流的能力、随波逐流地生活于广阔水域或大洋的微型水池生物 包括： （二）浮游生物监测 （一）采样 （二）检验标本的制作 （三）富有生物的计数 （四）生物量的测定 （二）浮游生物监测 采样步骤 确定采样地点、深度、频率 标签：日期，采样点，研究水域、样品类型，水深 记录本：地点、深度、类型、时间、气候条件、浊度、水温等 固定方法： 浮游植物可用鲁哥氏液、 5%福尔马林，另防褪色可加1ml饱和硫酸铜/L样品或避光保存 浮游动物可用70%乙醇、 5%福尔马林、鲁哥氏液；分析生物量的用5%福尔马林。另加洗涤剂可防止结团 采样量平行样 （二）浮游生物监测 教材 151 （二）浮游生物监测 （二）、检验标本的制作 浮游植物的永久性湿封片：摇匀沉淀样品，准确吸取0.1mL样品至载玻片上，盖上盖玻片。用粘合剂圈封盖玻片。对于半永久性封片，可在样品中加入甘油。 浮游动物的封片：从样品中吸取5mL样品，视样品浓度可作适当稀释或浓缩。用聚乙烯乳酰酚制备半永久性浮游动物封片。 （二）浮游生物监测 （三）、浮游生物的计数 ??总细胞数计数：费时、工作量大 ??自然单位或群单位：便于使用，但不准确 （样品的处理可能将细胞从群体中驱散出来） 显微镜 （二）浮游生物监测 （三）、浮游生物的计数 计数框 拉季(Lackey)微量(微断面)计数法 滤膜计数 （二）浮游生物监测 1、计数框 （二）浮游生物监测 所计数的生物数 每毫升的生物数 一个长条的