心肌收缩活动也随之减弱.pptVIP

离体蛙心灌流 目的 学习离体蛙心灌流的方法 了解心肌生理特性 观察Na+ 、K+ 、Ca+三种离子及肾上腺素、等化学物质对心脏活动的影响 原理 静脉窦能自动产生一定节律的兴奋，是蛙心的正常起博点。在适宜的环境中失去神经支配的离体蛙心在一定的时间内仍可产生规律的节律性兴奋和收缩活动，仍可保持对生物活性物质的反应性。离体心脏和在体心脏相似，其正常节律性活动和正常的反应性，需要一个适宜的理化环境，改变灌流液的成分可引起心脏活动的改变。 实验材料 牛蛙 生物信号采集分析系统、手术器械、斯氏蛙心套管、蛙心夹、张力换能器、试管夹、双凹夹、万能支架、滑轮、滴管、小杯 任氏液、0.65%NaCl、5%NaCl、2%CaCl2、1%KCl、1%乳酸、1:10,000肾上腺素、200U/ml肝素。 方法和步骤 离体蛙心标本的制备 1、取一蟾蜍毁其脑和脊髓后，取仰卧位固定于蛙板上，剪开胸壁，暴露心脏。 2、仔细观察心脏的解剖结构，心室、两个心房、动脉圆锥、动脉左右两支、静脉窦。 方法和步骤 3、在左主动脉下方穿一线，于动脉圆锥处结扎，再从左右两主动脉下方穿一线，并打一活结备用。左手提起左主动脉上的结扎线，右手用眼科剪在结扎线下方，沿向心方向将动脉上壁剪一斜口。选择大小适宜的蛙心套管，然后将盛有少量任氏液的斯氏蛙心套管，由开口处插入动脉圆锥。当套管进到大动脉圆锥基部时，应将套管稍稍后退，使尖端向动脉圆锥的背部后方及心尖方向推进，经动脉瓣插入心室腔内。此时可见套管中血液冲入套管，并使液面随心脏的波动而上下移动，表明操作成功.用滴管吸去套管中的血液，更换新鲜任氏液。稳定套管后，轻轻提起备用线，将左右动脉连同插入的套管用双结扎紧(不得漏液)，再将结线固定在套管的小玻璃钩上，然后剪断结扎线上方的血管。轻轻提起套管和心脏，在心脏下方绕一线，于静脉窦下方做一结扎并剪断结扎处下方的组织，使心脏离体。用任氏液反复冲洗心室内余血，使血管内灌流液不再有残留血液，保持套管内液面高度一致（最高处1.5-2cm）。 方法和步骤 4、将插好的离体心脏套管固定在支架上，用蛙心夹住少许的心尖部肌肉。再将蛙心尖上的系线绕过一个滑轮与张力传感器相连。注意:勿使灌流液滴到张力传感器上，调节显示器的心脏收缩的曲线幅度适中。 5、连接仪器设备 方法和步骤 观察项目： 记录正常心搏曲线，观察心率及收缩幅度，作为对照。 吸去管内的任氏液，换以5滴0.65%NaCl溶液，观察并记录心搏曲线变化。加上标记！ 马上用任氏液换洗2-3次，待心搏曲线恢复正常后，加入5% NaCl 2～3滴，观察并记录心搏曲线变化。 马上用任氏液换洗，待心搏曲线恢复正常后，加入1% CaCl2 1～2滴，观察并记录心搏曲线变化。 马上用任氏液换洗，待心搏曲线恢复正常后，加入1% KCl 1～2滴，观察并记录心搏曲线变化。 马上用任氏液换洗，待心搏曲线恢复正常后，加入1:10,000肾上腺素1～2滴，观察并记录心搏曲线变化 马上用任氏液换洗，待心搏曲线恢复正常后，加入1% 乳酸1～2滴，观察并记录心搏曲线变化。 注意事项 蛙心夹应一次就夹住心尖，不宜夹多次，以免损伤心脏。 蛙心插管内灌流液的液面高度应合适，一般以1～2cm为宜。在各项实验中，液面高度应始终保持一致。 加试剂时，先加1～2滴，用滴管混匀后如作用不明显可再适当补加。 当各项实验效果明显后，应及时将插管内的溶液吸出，用任氏液反复冲洗数次，待心搏曲线恢复正常后，再进行下一项实验。 各种药物或试剂液的吸管应分开，切勿混用。 每进行一项实验时，先记录一段正常对照曲线，然后再加入待试液，并记录其效应。 注意滴加任氏液于心脏表面使之保持湿润。 在实验过程中，基线位置及放大倍数、扫描速度不要再变动。 分析和讨论 试分析任氏液中适量钠离子,钙离子,钾离子对心肌的影响 用实验说明内环境相对恒定的意义 本实验说明心肌的哪些生理特征 为何强调实验保持灌流液面的恒定？灌流量对心脏活动的有什么影响？ 活的机体在心交感神经兴奋时或迷走神经兴奋时对心脏有何影响。 1．任氏液灌流心脏，可以保持较长时间的节律性舒缩活动。这是因为任氏液的主要离子成份、渗透压、PH值和蛙类细胞外液相近，为蛙心提供了一个适宜理化环境。 2．0.65% NaCl溶液灌流心脏，心搏减弱。心肌的收缩活动是由Ca2+触发。灌流液中无Ca2+，并使任试液中的[Ca]下降，以致心肌动作电位2期Ca2+内流减少，心肌收缩活动也随之减弱；胞外[Ca]下降，Ca2+内流减少，0期去极化速度减慢，传导性下降； [Ca] 下降， Ca2+不易进入细胞，4期自动除极的速度减慢，自律性下降。 5%NaCl灌流，稀释忽略不计，细胞外液钠离子浓度增大，Na+内流增多，竞争性抑制了钙Ca2+内流，导致细胞膜去极化速度