无菌操作.ppt

§4.离体培养的营养需求 MS 培养基配方（mgl-1) KNO3 1900 ZnSO4?7H2O 8.6 NH4NO3 1650 NaMoO4?2H2O 0.25 MgSO4?7H2O 370 CuSO4?5H2O 0.025 CaCl2?2H2O 440 KI 0.83 KH2PO4 170 CoCl2?6H2O 0.025 FeSO4?7H2O 27.8 Nicotinic acid 0.5 Na2-EDTA ?2H2O 37.3 Glycine 2.0 MnSO4?4H2O 22.3 VB6 0.5 H3BO3 6.2 VB1 0.1 培养基的配制方法在实验课具体讲述 第三章 细胞工程实验室配置及基本技术 §1 实验设置 §2 基本技术要求－无菌环境与无菌操作 §3 培养条件 §4 离体培养的营养需求 §1 实验室设置 细胞工程实验室必须满足三个基本的需要： 实验准备，包括培养基配制，洗涤与灭菌等； 无菌操作； 控制培养。 §1.实验室设置 一.实验室组成 1．基本实验室 准备室 准备室的功能就是进行一切与实验有关的准备工作。要求宽敞明亮，通风条件好。 接种室 接种室的功能是进行无菌操作。要求封闭性好，干燥清洁，能较长时间保持无菌。为了保持清洁，接种室应防止空气对流。 培养室 培养室的功能是对离体材料进行控制培养。其首要要求是要能控制光照和温度，其次为防止微生物感染，培养室应保持干燥和清洁。 §1.实验室设置 一.实验室组成 2．辅助实验室 细胞学实验室 其功能是对培养材料进行细胞学鉴定和研究。要求清洁、明亮、干燥，使各种光学仪器不受潮湿和灰尘污染。 摄影室及暗室 其功能是进行培养材料的摄影记录和胶片冲印。在有条件的情况下可建立此实验室。 生化分析室 在以培养细胞产物为主要目的的实验室中，应建立相应的分析化验实验室，以便于对培养物的有效成分随时进行取样检查。 §1.实验室设置 一.实验室组成 Culture room Preparation room sterilizing Sterile operation Cytology room Transition area 实验室布局示意图 §2.实验室设置 二.基本设备配置 基本设备 冰箱、天平、酸度计、、纯水器、电炉、培养基分装器、 搅拌器。 灭菌设备 蒸汽压力灭菌锅、干热消毒柜、过滤灭菌装置、喷雾 消毒器、紫外灯。 无菌操作设备 净化工作台、接种箱。 光温控制设备 时间程序控制器、空调及温度感应器。 细胞培养设备 培养设备根据需要而定，包括培养架、培养箱、 摇床、 生物反应器等。 细胞学鉴定设备 光学研究显微镜、实体显微镜、倒置显微镜。 §2.实验室设置 二.基本设备配置 灭菌设备 §2.实验室设置 二.基本设备配置 无菌操作设备 §2.实验室设置 二.基本设备配置 光照培养及控制设备 §2.实验室设置 二.基本设备配置 §2.实验室设置 二.基本设备配置 §2.基本技术 一.洗涤技术 ?洗涤液：? 弱 用重铬酸钾50g加入蒸馏水1L，加热溶化，冷却后再缓慢加入浓硫酸90ml。 中 用重铬酸钾50g加入蒸馏水100ml，加热溶化，冷却后再缓慢加入浓硫酸875ml。 强 与浓硫酸加热的同时缓慢加入磨碎的重铬酸钾，直到重铬酸钾达到饱和为止。一般浓硫酸1L加入重铬酸钾50g。 §2.基本技术 一.洗涤技术 洗涤方法 玻璃器皿洗涤 新的玻璃器皿 已使用过的试管、烧杯、三角瓶 吸管、滴管等内径狭小的玻璃制品 塑料用品洗涤 一般用合成洗涤剂洗涤，因其附着力较 强，因此冲洗时必须反复多次，最后用