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标题：乙型肝炎病毒表面抗原诊断（酶联免疫法）SOP文件 版本号： 修订号： 文件编号： 生效日期： 编制人： 审核人： 发布部门：质量管理小组
乙型肝炎病毒表面抗原诊断（酶联免疫法）SOP文件
本试剂盒在微孔条上预包被纯化的乙肝表面抗体（HBsAb），配以酶标记抗体（HBsAb-HRP）及TMB等其它试剂，采用夹心法原理检测人血清（或血浆）中乙肝表面抗原（HBsAg）。
试剂盒组成：
名称 48人份 96人份 480人份 名称 48人份 96人份 480人份 1、包被板条 1块 1块 5块 7、底物液A 1瓶 1瓶 1瓶 2、酶标抗体 1瓶 1瓶 1瓶 8、底物液B 1瓶 1瓶 1瓶 3、阳性对照 1支 1支 1支 9、终止液 1瓶 1瓶 1瓶 4、阴性对照 1支 1支 1支 10、封板膜 3张 3张 15张 5、样品稀释液 1支 1支 1支 11、自封袋 1个 1个 1个 6、浓缩洗涤液 1瓶 1瓶 1瓶 12、说明书 1份 1份 1份 操作步骤：
1.平衡： 将试剂盒各组分从盒中取出，平衡至室温（18-25℃），微孔板开封后，余者即时以自封袋封存。
2.配液： 浓缩洗涤液配置前充分摇匀（如有晶体应充分溶解），浓缩洗涤液和蒸馏水或去离子水按1:19稀释后使用。
3.编号： 取所需数量微孔条固定于支架，按序编号。
4.稀释： 每孔加入20μl样品稀释液。
5.加样： 分别在相应孔中加入100μl阴、阳性对照血清或待测样品。
6.温育： 置37℃温育60分钟。
7.加酶： 分别在每孔中加入酶标记抗体50μl。
8.温育： 置37℃温育30分钟。
9.洗涤： 用洗涤液充分洗涤5次，洗涤后扣干（每次应保持30-60秒的浸泡时间）。
10.显色： 每孔加底物A、B各50μl，轻拍混匀，37℃暗置30分钟。
11.终止： 每孔加入终止液50μl，混匀。
12.测定： 用酶标仪单波长450nm或双波长450nm/630nm测定各孔OD值（用单波长测定时，需用空白对照孔归零），并记录结果。
结果判定：
1、临界值（C.O.）=2.1×阴性对照孔OD平均值（阴性对照OD均值小于0.05时以0.05计算）。
2、结果判定：
1）样本OD值S/C.O.≥1者为HBsAg阳性；反之，判为HBsAg阴性。
2）阴性对照OD均值0.1或阳性对照OD均值≤0.4时，实验无效，应重新实验。
注意事项：
1. 操作应按说明书严格进行。
2. 所有样本、试剂和各种废弃物应按传染物处理。严格防止交叉感染，严格健全和执行消毒隔离制度。对于含有传染源和怀疑含有传染源的物质，应有合适的生物安全保证制度，下列为有关注意事项，但不仅限于此：
1）戴手套处理样本和试剂。
2）不要用嘴吸样。
3）不可在处理这些物品时吸烟、进食、喝饮料、美容和处理隐形眼镜等。
4）用消毒剂对溅出的样品或试剂进行消毒。
5）按当地的有关条例来消毒和处理所有样本、试剂和潜在污染物。
3.加试剂前，应先将试剂瓶翻转数次，使液体混匀。建议使用加液器进行加液，并经常对加液器进行校准。加液时注意勿使加液枪头接触孔内液体，避免液体间相互污染。仔细操作，避免加样时在孔中产生气泡。
4. 每板建议设阴、阳性对照各两孔，设空白对照1孔，空白对照不加样本和酶标抗体，其余各步相同。
5. 避免在孵育和保存过程中试剂被阳光暴晒和接触次氯酸等强氧化性物质。
6. 孵育温度要保持在37℃±1℃，温度过高或者过低可能会影响检测结果的准确性。
7. 封板膜为一次性使用，重复使用可能导致污染。
8. 洗板机在使用结束后要使用新鲜蒸馏水或高品质去离子水冲洗干净，以防止管路堵塞和腐蚀。洗涤时各孔均需加满但不溢出，防止孔内有残留物未能洗净。
9. 每次洗涤结束后请尽早进行后续加液操作，避免长时间暴露而引起的错误结果。
10. 使用全自动化仪器时，封板和洗板后扣干步骤可以省略。但需要注意保证洗涤剂的加液量，保证洗涤后将微孔板中的洗液充分吸干，以免对实验造成错误的结果。
11. 确保反应孔板的底部清洁和干燥，在读板前要确保孔中液体没有气泡。
12. 终止后请尽早用酶标仪读数（建议10min内完成读值），避免放置过长时间而引起的错误结果。
13. 检测结果建议使用酶标仪进行读数测量。样本的检测读值与样本中抗原的浓度不一定呈正相关关系。
14. 检测结果呈阴性的样本，不能绝对样板中没有低浓度抗原的存在，不能完全排除HBV感染的可能。
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