无菌检测方法.doc

医疗器械产品无菌检测方法 (第00版) 文件编号： 编制： 日期 审核： 日期 批准： 日期 受控状态： 分 发 号： 年 月 日 发布 年 月 日 实施 目的 建立无菌检测标准规程，对灭菌后的医疗器械产品进行无菌检测，以确定灭菌的有效性。 范围 本规程适用于本公司对医疗器械产品的无菌检测。 依据 《中国药典》2010版二部 设备、器皿、药品的准备 4.1 设备的准备 电子天平、干热灭菌箱、高压灭菌箱、洁净工作台、放大镜、移液枪、电热培养箱、霉菌培养箱、冰箱、斜口钳、接种环、酒精灯 4.2 器皿的准备 锥心瓶（500ml）、烧杯（1000ml）、试剂瓶（60ml）、量筒（50ml、1000ml）、培养皿（Ф90mm×15mm）、斜口钳、玻璃棒。 4.3 药品的准备 硫乙醇酸盐流体培养基、改良马丁琼脂培养基、纯化水、pH7.0 无菌氯化钠溶液。 器皿的清洗 将所需的锥形瓶、烧杯、试剂瓶、培养皿、玻璃棒放入超声波清洗机中用纯化水清洗两次，每次15分钟，将清洗完的器皿在180℃条件下进行干热灭菌2小时。 取样 按灭菌批次或者生产批次进行取样，随机抽取同一型号的产品4件作无菌检测样品 培养基的制备 7.1 硫乙醇酸盐流体培养基的制备 取15g硫乙醇酸盐流体培养基和500ml纯化水于烧杯中混合，加热至微沸（注意加热过程中要不断地搅拌，使其混合均匀）用棉花塞塞紧复用无尘布和绳子绑好后转移至高压灭菌锅内灭菌，灭菌温度为121℃，灭菌时间30分钟。灭菌后摇均，冷却至45℃待用。 7.2 改良马丁培养基的制备 取21g改良马丁培养基粉末和500ml纯化水于烧杯中混合，操作方法同6.1。 8. 培养基灵敏度检查 8.1 菌种的要求 培养基灵敏度检查所用的菌株（金黄色葡萄球菌、白色念珠菌）传代次数不得超过5代。 8.2 菌液的制备 接种金黄色葡萄球菌的新鲜培养物至硫乙醇酸盐流体培养基上，30-35℃培养24小时；接种白色念珠菌的新鲜培养物至改良马丁琼脂培养基上，23-28℃培养24小时。 将上述经24小时培养后的培养物用0.9﹪无菌氯化钠溶液制成每1ml含菌数小于100cfu(菌落形成单位)的菌悬液。制备好的菌液应在2-8℃条件下保存，并在24小时内使用。 8.3 接种及培养 取每管装量12ml的硫乙醇酸盐流体培养基3支，其中2支接种小于100cfu的金黄色葡萄球菌，另一支不接种作为空白对照，30-35℃培养3天逐日观察并记录。 取每管装量9ml的改良马丁琼脂培养基3支，其中2支接种小于100cfu的白色念珠菌，另1支不接种作为空白对照，23-28℃培养5天，逐日观察记录。 8.4 灵敏度检测结果判断 空白对照管应无菌生长，若加菌的培养基试管菌落均生长良好，则判定该培养基的灵敏度检查符合规定。 9. 供试品的无菌检测 9.1 对照试验 取每管装量12ml的硫乙醇酸盐流体培养基3支，接种小于100cfu的金黄色葡萄球菌，另一支不接种作为空白对照，30-35℃培养14天逐日观察并记录。 取每管装量9ml的改良马丁琼脂培养基3支，其中2支接种小于100cfu的白色念珠菌，另1支不接种作为空白对照，23-28℃培养14天，逐日观察记录。 9.2 供试品的准备及接种 于微生物实验室超净工作台内将样品剪成小碎段（2～3cm）,其中2件接种于各培养皿足以浸没供试品的适量硫乙醇酸盐流体培养基中，另外2件接种于各培养皿足以浸没供试品的适量改良马丁琼脂培养基中，冷却。 9.2 培养 将接种过的硫乙醇酸盐流体培养基的培养皿倒置于电热培养箱中30～35℃条件下培养14天，逐日观察是否有菌落生长并记录； 将接种过的改良马丁琼脂培养基的培养皿倒置于霉菌培养箱中23～28℃条件下培养14天，逐日观察是否有菌落生长并记录。 10. 供试品无菌检测结果判定 若上述接种后的培养基经14天培养后均无菌落生长，则可判定供试液为无菌，即为合格；反之，则为不合格。 11. 检测频次 外包灭菌产品的无菌验证应每年做一次，并以最难灭菌产品的无菌检测为准；外包灭菌产品的无菌检测按灭菌批次随机取样检测，每月一次 12. 无菌检测报告（见附表1） 13. 文件版本修改记录（见附表2） 无菌检测报告 WIL