石蜡切片的制作.docVIP

石蜡切片的制作 染色液和固定液的配制 ①Carnoy’S固定液： 无水酒精60mL，氯仿30mL，冰醋酸10mL。 ②Harris苏木精染色法： 10％苏木精(950或无水酒精)溶液 10mL 10％钾矾水溶液 200mL 先将钾矾水溶液加热溶解，然后将溶的苏木精酒精溶液倒入，继续加热煮沸lmin，停火后缓慢加氧化汞，再加热煮沸lmin，速将三角瓶放入冷水内冷却。同时加入冰醋酸6～10mL。 ⑨奥新兰一沙黄染液配制：奥新兰，沙黄，铁铵矾，醋酸一盐酸缓冲液100mL，上液临用时混合。 ④阿利新兰醋酸液： 阿利新兰(Alcian．blue，简称AB)lg， 3％醋酸水溶液 100mL。 ⑤1％高碘酸液： 高碘酸溶解在100mL蒸馏水中。 ⑥Shifr试剂的配制方法： 煮沸蒸馏水200mL，停火后加入碱性品红，不停搅拌使溶解。待溶液冷至50，加入1N HC20mL冷至室温(25)加偏重亚硫酸钠荡，置加活性充分摇荡数分钟，过滤。滤液应呈无色或淡 1 %冰醋酸水溶液：　冰醋酸1ml , 蒸馏水100 ml 。 HE染色显示肠道黏膜上皮淋巴细胞 奥新兰—沙黄染色显示肠道内肥大细胞 AB/SO染色法 阿利新兰醋酸染色显示肠道内杯状细胞 AB-PAS染色法 3.3.3 肠道的石蜡切片的制作 取材：用锋利的刀切取罗非鱼的一小段前肠（据胃5cm左右位置的前肠），组织块的规格为 3～5mm×3～5mm×10～15mm。 固定：采用Bouin氏固定液装瓶固定，固定液用量一般为组织块体积的10～20倍。 冲洗：固定12～24h后，将材料自固定液中取出后，在70%酒精中换洗几次，可在酒精中加几滴氨水至洗去黄色为止。 脱水：70%酒精（1h）→80%酒精（1h）→90%酒精（1h）→95%酒精（1h）→无水乙醇Ⅰ（1h）→无水乙醇Ⅱ（1h） 透明：无水乙醇与二甲苯溶液（1:1）（1h）→二甲苯Ⅰ（1h）→二甲苯Ⅱ （1h） 浸蜡：浸蜡的全过程应在恒温设备中进行，将恒温箱调至58℃。 二甲苯与石蜡混合液（1:1）（1h）→石蜡Ⅰ（1h）→石蜡Ⅱ（1h） 浸蜡必须彻底，否则组织内残留透明剂会造成切片过程的困难和影响切片 的质量。 包埋：在小纸盒内注入溶化的石蜡，将已浸蜡的组织块置入其内，使蜡块迅速冷却硬固，组织块在蜡块中可长期保存。 切片：包埋后的组织块经修整后，用切片机切成5~7μm的石蜡带。 粘片：将组织石蜡带在50摄氏度的温水中展片，然后用经1%HCl溶液处理干净的载玻片捞片，组织带即可粘在载玻片上。 烤片：将粘好的载玻片置于35℃左右的温箱中烤干，待2~3小时后，即可取下编号。 苏木精—伊红染色：将烤干的片进行染色。 ①脱蜡：将烤干的切片放入二甲苯(I)10min→二甲苯(Ⅱ)10rain。 ②复水：将脱蜡后的切片移入100％酒精5min→95％酒精5min→85％酒精5min→70％酒精5min→蒸馏水5min ③HE染色显示肠道黏膜上皮内淋巴细胞：将蒸馏水洗涤后的切片移入Harris苏木精液中，10min，使细胞核着色；用自来水洗去切片上残余染液；用1％的盐酸酒精分色3秒；用自来水浸洗3h，显微镜下观察，直到胞核蓝化为止；然后切片入曙红溶液中染色5min，使细胞质着色。经95％酒精与100％酒精脱水，二甲苯透明后，中性树胶封片。 ④奥新兰一沙黄染色显示肠道内肥大细胞：切片常规脱蜡下行至蒸馏水→奥新兰一沙黄液染色15～20min→蒸馏水速洗，镜检→95％和100％酒精分色脱水1—2min→二甲苯透明→中性树胶封片。 ⑤阿利新兰醋酸染色显示肠道内杯状细胞：切片经脱蜡下行入蒸馏水→阿利新兰醋酸染色10min→蒸馏水洗→1％高碘酸水液氧化5min→蒸馏水略洗一Schiff试剂染色（37℃恒温箱）30min→普通水洗3次→蒸馏水2min→Ehrlich苏木精染色5min→95％酒精和100％酒精脱水→二甲苯透明，中性树胶封片。 切片经脱蜡下行入水：二甲苯(30 min)一二甲苯(10 min)一无水乙醇(5 min)一无水乙醇(5 min)一 95％ 乙醇(5 min)一85％乙醇(5 min)一70％ 乙醇(5 min)一流水冲洗(20 min)。人Ehrlich苏木精染 色12 min，蒸馏水速洗。盐酸酒精分色，镜检控制时间。入伊红染色2 min，蒸馏水略洗。盐酸酒精分色，镜检控制时间。经95％酒精与无水酒精脱水，二甲苯透明，中性树胶封片。 阿利新兰—番红复合染色液的方法称Scaba法 阿利新兰—番红分别染色的方法称Spicer法 罗非鱼肠道的石蜡切片 1．4．1 取材 按常规方法解剖，迅速取出罗非鱼前、中和后肠3段，长度6～10 cm，浸入pH 7．2的