第五章检疫性真菌病害.ppt

第五章 检疫性真菌病害 植物检疫性真菌常见检疫检验技术 直接检验 染色检验 洗涤检验 保湿萌芽检验 分离培养检验 1.直接检验 适用范围：具明显症状的植物材料 主要工具：放大镜或解剖镜，主要是利用肉眼现场快速初检 2.染色检验法 原理：染病的组织，或病原菌本身，经特殊的化学药品处理后，可带有特殊的颜色 例如：马铃薯癌肿病（Synchytrium endobioticum）薯块上癌瘤不明显时，可做徒手切片，加1滴1％的“藏花红”染色液，健康组织细胞壁呈亮红色，感病组织细胞壁呈暗红色。 3.洗涤检验法 原理：种子表面常附着真菌孢子，将一定量的样品放入容器内，加一定量的无菌水，充分振荡，可使病菌孢子洗涤下来，而后离心后，可沉淀，镜检沉淀物可确定其种类和数量。 主要仪器和试剂：振荡器、离心机、显微镜、0.1％吐温溶液等 主要试验流程如下： 影响检验结果的因素： 种子表面的病菌孢子不一定能完全洗涤下来； 离心管内，悬浮液表面常形成一层极难沉降的孢子薄膜，管壁上也可能黏附孢子； 将悬浮液滴于玻片时，由于孢子迅速沉淀，造成一些视野间孢子分布极不均匀； 操作不够严格，造成人为误差。 4.保湿萌芽检验 原理：种子携带的真菌，无论外表黏附的还是潜伏种子内的，在种子萌发阶段即可开始侵染，甚至有些在种子还未萌发时就可长出病菌。 主要仪器及试剂：吸水纸、沙土、冰箱、培养箱等。 主要包括：保湿培养检验、沙土萌芽和土内萌芽检验等三种方法，其中保湿培养检验法是国内外最常用的一种方法。 吸水纸法 5.分离培养检测 常规植物病理学方法 小麦矮腥黑穗病 Wheat dwarf bunt 分布：是麦类黑穗病中危害最大、防治最难的一种病害，它于1847年及1860年先后发现于捷克和美国，在全世界范围内传播和蔓延，目前已在欧洲、北美、南美、澳洲、亚洲、非洲等40多个国家发生。 寄主：禾本科5个族，18个属，65个种。主要栽培植物有冬小麦、大麦、黑麦，冰草属为天然发病的主要禾草寄主。 危害性：1962年美国减产68.7％，1972年西部7州，平均减产17％，损失1. 2亿Kg。菌瘿可存活10年以上。 症状：系统侵染性，表现为：病株特矮（1/3～1/2），分孽特多（1倍），病穗特密，病粒特硬，有鱼腥臭味。 病原菌：Tilletia controversa J.G. Kühn, in Rabenhorst, Hedwigia 13: 188 (1874) Position in classification:Tilletiaceae, Tilletiales, Exobasidiomycetidae, Ustilaginomycetes, Basidiomycota, Fungi 形态特征：冬孢子 ，冬孢子萌发。 生物学特征：冬孢子萌发-2～15（3~8）℃ ，弱光400～600lx，土壤含水量35～88％，萌发周期长3个月。冬孢子内含有内源孢子萌发抑制剂。 生理分化：美国15小种，德国8个小种。 初侵染来源：土壤带菌，冬孢子可存活1年，菌瘿可存活3～10年。 传播：种子；运输工具、包装材料及下脚料；粪肥；雨水。 发病规律：侵染期长，12月～4月，1～2月是盛期，幼嫩分蘖处侵入，细胞间蔓延，50天到生长点，随寄主生长，菌丝进入穗原始体，到各个花器，破坏子房，形成冬孢子堆。长时间3～8 ℃低温利于侵染；冬麦区苗期日平均温度0～10 ℃达45d以上，即使没有雪覆盖也同样利于发病。 TCK的循环: 流行因素：大面积感病品种、足够菌源、冬季日均温0～10 ℃的日数》40d、稳定积雪70d以上，积雪厚度10cm以上。 国内适生区域：西北高原冬麦区和新疆、青藏高原晚播冬麦区极为适宜病害的发生，属高度危险区；江淮流域及华北、东北冬麦区基本适合病害发生，属危险区；西南高海拔地区有时也具备病菌入侵条件，也可能受害；春麦区不发病。 检验与检测： 直接检查：放大镜 菌瘿 洗涤检查：50g＋100ml无菌水，振荡5min，10～15ml离心3min，定容，制片观察。 冬孢子鉴定：孢子形态鉴定（网脊高度、胶鞘厚度、网目径、孢子大小、不育细胞等）。 冬孢子自发荧光实验：TCK孢子于荧光显微镜下有自发荧光现象，而TCT孢子则无。 冬孢子萌发试验：5 ℃、17 ℃下，光照。矮腥孢子5 ℃下21d开始萌发， 17 ℃不萌发。 PCR技术：引物5`-TGACAACGGATCTCTTGGTT-3`、 5`- TCACCAACTCCAAGCAATCT-3 `,206bp处有特异扩增带。 检疫和防治 进口小麦和原粮必须进行检疫，病麦需除害处理 带菌小麦原粮必须集中在几个规定有条件的口岸加工灭菌处理。采用高温灭菌法，130℃30min或120 ℃1h。 病区用40％五氯硝基苯，种子重量0.5％