纳米粒子介导血管紧张素ii的1型受体相关蛋白对大鼠血管内膜.ppt

技术路线： 雄性12周龄的SD大鼠被用于本实验。 2F气囊导管造成大鼠颈动脉损伤模型。 利用纳米粒子载体系统，将纳米粒子-ATRAP或 空纳米粒子转染在局部损伤的血管，浸润15分钟， 缝合血管及皮肤切口。 2、4、8、16天后分别切取标本，用于基因转染\ 率的观察、免疫组织化学染色及mRNA的检测。 免疫组织化学染色用于观察血管形态学的变化、 PCNA、TUNEL、MCP-1、TNF-a、IL1、IL6等在 血管组织中的变化。 Northern Blot分析bax、bcl-2、bcl- xLmRNA及 MCP-1、TNF-a、IL1、IL6mRNA的变化。 观察指标： 纳米粒子介导的ATRAP的转染效率（已有部分预 实验结果）。 血管形态学的变化(测量软件购置于Densitograph, ATTO Corporation)。 PCNA用于测定细胞增生情况。 TUNEL测定 (terminal deoxynucleotidyl transferase (TdT) mediated dUTP nick end-labeling, 末端脫氧核甘酸轉移酶) （ MEBSTAIN 凋亡试剂盒 II）。 免疫组织化学染色观察ATRAP对炎性细胞因子的 抑制作用。 bax、bcl-2、bcl- xLmRNA的表达。 MCP-1、TNF-a、IL1、IL6mRNA的表达。 四、ATRAP基因试剂的初步研究 在被气囊导管损伤后的大鼠颈动脉壁外局部转 染在生物蛋白胶或悬浮液内的纳米粒子介导的 ATRAP，因纳米粒子可以穿透血管壁，观察纳米粒 子-ATRAP在不同时间及浓度的转染率及对血管内 膜增生的抑制作用。 技术路线： 雄性12周龄的SD大鼠被用于本实验。 2F气囊导管造成大鼠颈动脉壁损伤。 将不同浓度的纳米粒子-ATRAP悬浮液或在生物蛋 白胶中，涂抹在局部损伤的血管外，缝合皮肤切口。 2、4、8、16天后分别切取标本，分别观察ATRAP 的转染率及增生内膜的变化情况。 观察指标： 纳米粒子介导的ATRAP基因制剂的转染效率 ，观察最佳给药途径、时间及药物浓度。 纳米粒子-ATRAP对血管形态学的变化的影响 (测量软件购置于Densitograph, ATTO Corporation)。 预实验结果 预实验初步显示PLGA介导的ATRAP有较好的稳定性，释放时间约10-14天可到达平台期，也已初步在大鼠血管内膜及中膜VSMC内观察到纳米粒子转染后ATRAP的mRNA及其蛋白产物的表达。 纳米粒子转染后ATRAP的mRNA及其蛋白产物的表达 荧光显微镜下所见大鼠血管壁上VSMC内纳米粒子转染ATRAP基因的表达 免疫组化显示在内膜及中膜层的VSMC内可见ATRAP表达 Chin Med Sci J. 2007;22:22-26, Chin Med Sci J. 2009;24(2):91-96 研究目标 应用聚乳酸聚乙醇酸共聚物（PLGA）和聚乙烯醇(PVA )包载ATRAP基因质粒，制备纳米级粒子混合物。 在大鼠离体VSMC及大鼠颈血管损伤模型上，通过纳米粒子介导的基因转染的方法，以VSMC凋亡、血管炎性因子的变化及对血管内膜增生的影响为观测指标，评价纳米粒子携带ATRAP基因质粒转染的效率及进一步提高转染率的可行性。论证纳米粒子介导的ATRAP在VSMC凋亡及血管内膜增生抑制上的作用及其细胞分子机制。 制备包含在医用蛋白胶或悬浮液内的纳米粒子介导的ATRAP基因制剂，使其可以直接在术中涂于受损血管外膜或通过腔内介入的方法到达受损血管，以解决目前血管外科术后内膜增生的世界性难题。 Thanks for Your Attention! 动脉粥样硬化是一组动脉硬化的血管病中常见的一种，病变首先从内膜开始，平滑肌细胞、巨噬细胞及T淋巴细胞的聚集。其次是胶原、弹性纤维及蛋白多糖等结缔组织和平滑肌细胞的增生，然后血栓的形成和钙化。动脉粥样硬化引起的相关疾病，如下肢缺血性疾病、冠心病、颈动脉狭窄或闭塞导致的脑卒中。在我国，动脉粥样硬化引起的心脑血管疾病已逐步上升为死亡的主要原因。 虽然血管搭桥术及经皮血管成型术等取得了令人嘱目的成就，但是术后血管及吻合口的内膜增生，使远期通畅率常不能令人满意；而且很多患者的病变血管远端缺乏良好流出道的多平面，多节段的广泛的动脉闭塞，甚至使他们不能受益于这些治疗。 因此需要研究新的治疗方法。基因治疗被视为未来从根本上解决血管病变的方法之一，其是应用基因工程和细胞生物学技术，将一些具有治疗价值的外源性基