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前 言 本标准按照GB/T 1.1-2009 和 GB/T 20001.4-2001给出的规则起草。 本标准由国家烟草专卖局提出。 本标准由归口。 本标准起草单位： 本标准主要起草人： 卷烟 主流烟气中主要杂环胺类化合物（AαC、MeαC、Trp-p-1和Trp-p-2）的测定 液相色谱-串联质谱法 1 范围 本标准规定了卷烟主流烟气中主要杂环胺类化合物的测定方法。 本标准适用于卷烟主流烟气中主要杂环胺类化合物的测定。卷烟样品主流烟气中主要杂环胺类化合物AαC, MeAαC, Trp-p-1和 Trp-p-2的定量检测限分别为1.85ng/cig、0.39 ng/cig、0.27ng/cig和0.29ng/cig，检出限分别为0.56ng/cig、0.12 ng/cig、0.08 ng/cig和0.09ng/cig。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB/T 19609 卷烟 用常规分析用吸烟机测定总粒相物和焦油 3 原理 用玻璃纤维滤片捕集卷烟主流烟气中的总粒相物，盐酸甲醇溶液超声萃取，阳离子交换固相萃取柱净化，用液相色谱-串联质谱（HPLC-MS/MS）测定，内标法定量。 4 试剂与材料 除特别要求以外，均应使用色谱纯级试剂，水应符合GB/T 6682中一级水的规定。 4.1 甲醇。 4.2 乙腈。 4.3 甲酸。 4.4 甲酸盐酸。 ％盐酸溶液2-amino-9H-pyrido[2,3-b] indole(AαC, CAS:26148-68-5)，纯度应不小于97%。2-amino-3-methyl-9H-pyrido [2,3-b]indole (MeAαC, CAS: 68006-83-7)，纯度应不小于97%。3-amino-1,4- dimethyl-5H-pyrido [4,3-b]indole(Trp-p-1, CAS:62450-06-0), 纯度应不小于97%。3-amino-1-methyl-5H- pyrido[4,3-b] indole (Trp-p-2, CAS:72254-58-1)，纯度应不小于97%。2-amino-3,4,7,8-tetramethylimidazo[4,5-f]quinoxaline (4,7,8-TriMeIQx, CAS: 132898-07-8)，纯度应不小于97%。标准溶液 AαC（4.11）、MeAαC（4.12）、Trp-p-1（4.13）和 Trp-p-2（4.14），置于不同的棕色容量瓶中，用甲醇（4.1）溶解，分别配制成浓度为100μg/mL的标准储备液。于℃避光保存，有效期为个月。AαC、 MeAαC、 Trp-p-1和 Trp-p-2标准储备液(4.16.1)10mL，2mL、1mL和1mL至同一100mL容量瓶中，用甲醇（4.1）稀释至刻度。该溶液于避光保存有效期为个月于避光保存有效期为个月4,7,8-TriMeIQx（4.15）用甲醇（4.1）配制成浓度为100μg/mL的内标储备液。于避光保存，有效期为个月。于避光保存有效期为个月标准工作溶液 分别移取（）容量瓶中，定容即配制成如表1所示的级标准溶液。表1 系列标准工作溶液 (μg/L) 化合物 1# 2# 3# 4# 5# 6# AαC 1 2 5 10 20 50 MeAαC 0.2 0.4 1 2 4 10 Trp-p-1 0.1 0.2 0.5 1 2 5 Trp-p-2 0.1 0.2 0.5 1 2 5 内标 5 5 5 5 5 5 4.19 有机相针式过滤器，0.45μm。 5 仪器设备 .1 高效液相色谱—串联质谱仪，配备。 .2 分析天平：感量0.1 mg。 .3 pH计。 5.4 超声波发生器。 GB/T 19609用两张直径为44mm的滤片收集10支卷烟的粒相物, 每个样品应平行测定两次。 6.2 样品萃取 将两张滤片放入100mL锥形瓶中，准确加入0mL盐酸甲醇溶液（）μL一级内标溶液（4.17.2），用有机相针式过滤器（4.19）过滤后取适量溶液转移至2mL色谱瓶中供HPLC-MS/MS分析。 6.4 液相色谱参考条件 ——色谱柱：C18，1.8μm,100mm×2.1mm(i.d.)或相当者； ——柱温：30℃； ——流速：200μL/min； ——进样体积10μL——流动相A：甲酸/2mM甲酸铵缓冲溶液（pH=4.5），流动相B：0.1%甲酸乙腈溶液，梯度洗脱条件见表2。 表2 梯度洗脱条件 时间 min A % B % 0 9