秋水仙素浓度对大蒜根尖细胞中期分裂指数的影响-.doc

秋水仙素对大蒜根尖细胞有丝分裂的影响 广二师生物系hexuecheng 摘要：为了解秋水仙素及其浓度对大蒜根尖细胞有丝分裂的影响，以大蒜根尖为材料，在不同浓度（0.00%、0.025%、0.05%）相同时间（4h）条件下测定了根尖细胞的中期分裂指数及细胞加倍指数。结果表明 ,秋水仙素在不同浓度下对大蒜根尖细胞中期分裂指数和细胞加倍指数的影响是不相同的。0.025%的秋水仙素处理的细胞中期分裂指数较高，为14.2%，细胞加倍指数为0.3%：0.05%的中期分裂指数较低，为13.8%，细胞加倍指数却较高，为0.5%；对照组0.00%的中期分裂指数最低，为4.0%，细胞加倍指数为0.0%。 关键词：大蒜 秋水仙素 中期分裂指数 细胞加倍指数 前言：[1]染色体是遗传物质最主要的载体。在有丝分裂过程中 ,染色体的形态和结构表现出一系列规律性的变化。尤其是分裂中期的染色体收缩程度很好 ,适于进行染色体形态的识别和研究。染色体计数、核型分析或显带技术等遗传学研究就是以中期染色体为研究对象。但在整个细胞分裂周期中 ,中期细胞数较少 ,且染色体因纺锤丝的牵引而紧密排列在赤道板上 ,造成计数及识别染色体形态、结构的困难。为了获得较多的分裂期细胞,最理想的措施是使细胞同步分裂。[1]常用低温或化学药剂处理可以达到此目的,目前使用最广泛的化学药剂为秋水仙素，其能抑制有丝分裂，破坏纺锤体，使染色体停滞在分裂中期。许多研究者只是选用单一适宜浓度的秋水仙素对实验材料进行预处理，没有对秋水仙素的浓度进行实验。而且，大蒜是常用的细胞分裂的研究材料，目前有关于秋水仙素对大蒜根尖细胞有丝分裂影响的报道较少。基于以上两点，笔者选用了2种不同浓度的秋水仙素处理大蒜根尖，并以蒸馏水处理作为对照。目的在于研究秋水仙素及其浓度对大蒜根尖细胞有丝分裂的影响，为秋水仙素在大蒜的研究上提供研究依据。 1材料与方法 1.1主要试剂 秋水仙素:用蒸馏水配制成0.025%和0.05%的溶液。 卡诺固定液:甲醇-冰醋酸（3:1） 解离液:1mol/L盐酸。 1.2材料 白皮大蒜。 1.3方法 1.3.1根尖培养方法 选择大小均匀无损伤的大蒜蒜瓣置于培养皿中 ,在室温条件下用蒸馏水培养。由于大蒜在培养过程中分泌抑制物质 ,抑制根的生长 ,所以每天换水 2 次。待根尖长至 1.5～2. 0 cm 时，于上午 9 :00～10 :00 取材。 1.3.2材料处理方法 分别用0.00%（用蒸馏水代替）0.025%、0.05%的秋水仙素溶液处理大蒜根尖4h ,每种处理的大蒜至少 10 头 ,之后分别用卡诺氏固定液于 4 ℃冰箱中固定 24 h ,固定后的材料用 1 mol/ L HCl 在60 ℃恒温下酸解 10 min。再用蒸馏?水洗3?～5次，蒸馏水浸泡20min。用?改良苯酚品红染色液染色?10min，把根尖放在载玻片上，切取分生区部分，加一滴染液，用镊子捣碎，盖上盖?玻片，?然后在盖玻片上放上一滤纸，?用铅笔上的橡皮头轻轻敲打盖片，?使细胞和染色体分散，镜检。每个浓度处理选择有代表性的2个制片，每张片选五个视野，一个视野观察100个细胞，即每个浓度处理统计1000个细胞。从中统计出中期细胞数和加倍细胞数。 1.3.3统计分析 中期分裂指数和细胞加倍指数按以下公式计算： 中期分裂指数=中期分裂细胞数/观察细胞总数×100% 细胞加倍指数=细胞加倍数/观察细胞总数×100% 2结果与分析 2.1不同秋水仙素浓度对中期分裂指数的影响 不同浓度的秋水仙素对大蒜根尖细胞有丝分裂的影响见表1。0.025%和0.05%秋水仙素处理4h后，大蒜根尖细胞中期分裂指数均明显高于对照组，说明秋水仙素对细胞进入分裂期有明显的促进作用，但浓度过高促进作用会减弱。不同浓度的秋水仙素对中期分裂指数的影响规律不明显。其中以较低浓度0.025%秋水仙素处理中期分裂指数较大（14.2%），而较高浓度0.05%秋水仙素处理的中期分裂指数相对较小，为13.8%促进分裂作用减弱。说明0.05%秋水仙素浓度过高，对洋葱根尖有较高的毒害作用。 表1 不同浓度秋水仙素对大蒜根尖细胞中期分裂指数的影响 秋水仙素浓度（%） 中期分裂指数（%） 0.00 （对照组） 4.0 0.025 14.2 0.05 13.8 2.2不同秋水仙素浓度对细胞加倍指数的影响 不同浓度的秋水仙素对大蒜根尖细胞加倍指数的影响见表2。结果表明，大蒜根尖细胞经秋水仙素处理后，细胞加倍现象明显，两种浓度处理的细胞加倍指数均明显高于对照组。且不同浓