果蝇杂交试验.doc

果 蝇 杂 交 实 验 实验人：  实验时间： 实验地点： 前 言 经典遗传学的三大遗传定律分别是：分离定律，自由组合定律和连锁与交换规律。果蝇具有生活史短、繁殖率高、饲养简便等特点，是研究遗传学的好材料，尤其在基因分离、连锁、交换等方面，对果蝇的研究更是广泛而充分。本次通过实施已有实验方案，观察后代中果蝇的各种性状，结合各种统计处理方法，从而证明这三大定律。 分离定律（law of segregation）是指在生物的体细胞中，控制同一性状的遗传因子成对存在，不相融合；在形成配子时，成对的遗传因子发生分离，分离后的遗传因子分别进入不同的配子中，随配子遗传给后代。其表现在两个具有相对性状的纯种个体进行杂交，F1代全部表现显性个体的性状，F1代自交，F2代出现隐性个体的性状。并且，在理论上，F2代中，显性个体与隐性个体的比例为3:1。 自由组合定律（the Law of Independent Assortment）是指非同源染色体上的决定不同对性状的基因在形成配子时等位基因分离，不同对基因（非等位基因）之间互不干扰，其实质是F1产生配子时，等位基因分离，非同源染色体上的非等位基因自由组合。最初由孟德尔在做两对相对性状（豌豆的子叶颜色黄色，绿色，圆粒和绉粒）的杂交实验时发现，基因分离比为9:3:3:1。独立组合位于不同染色体上的2个等位基因是独立传给子代的。因此可在验证自由组合定律的同时，选取其中一组性状来验证分离定律。用于杂交的2对等位基因必须位于不同染色体上，即不能连锁。 伴性遗传是指性染色体上的基因所控制的性状的遗传方式。又称性连锁（遗传）或性环连。此病分为X伴性遗传病和Y伴性遗传病两大类。常染色体上的基因遗传时，性状分离在雌雄两性中有同样的表现。性染色体上的一对等位基因伴随性染色体遗传，其性状遗传与性别相联系。对于此次实验，果蝇为XY型性别决定，但与一般XY型性别决定所不同的是，果蝇的性别由X染色体的数目决定，含有2条及以上X染色体的果蝇为雌性。伴性遗传是指生物某些性状的遗传常与性别联系在一起的现象，出现这种现象是由于支配某些性状的基因位于性染色体上。控制果蝇眼色的基因位于X染色体上，在Y染色体则没有与之相应的等位基因。将红眼（W）果蝇和白眼（w）果蝇杂交，其后代眼色的表现与性别有关。而且，正反交的结果不同。 实验材料及方法 1.1 实验材料 黑腹果蝇：2＃品系（灰黄体身、红眼、残翅） 6＃品系（灰黄体身、白眼、小翅） 1.2 实验用品 1.2.1 器材 白瓷盘，麻醉瓶，培养瓶，双目显微镜，恒温培养箱、烧杯、镊子、棉塞，解剖针 1.2.2 试剂 麦片、蔗糖、琼脂粉、丙酸、乙醚等 1.3 培养基的配置 70ml水+0.85g琼脂+7g蔗糖→煮开至琼脂溶化→加入麦片糊（30ml冷水与8g麦片混匀）→煮开约3-5分钟，成粘稠的糊状→稍凉后加入1g酵母粉，0.4-0.5ml丙酸，混匀→分装，趁热塞上棉花塞 1.4 实验流程 1.4.1 果蝇的麻醉 ?? 将果蝇转至麻醉瓶中，滴数滴乙醚滴在麻醉瓶的棉塞上，塞紧瓶塞，略等1-2min，果蝇开始变得不活动，由瓶底跌落在瓶底，呈昏迷状态（附肢收缩，双翅紧贴背部）。若在观察中果蝇苏醒了，需要再麻醉时，可滴几滴乙醚入再麻醉皿的滤纸上，立即扣住复苏的果蝇，数秒钟后继续观察。当看到果蝇不动时，即可倒在白瓷板上观察性状与雌雄区别。 若其翅膀外展45度角时说明果蝇已死亡，因此要把握好麻醉时间，以自然停飞状态较好。 原种培养 分别保留亲本于一培养瓶中，每2至4周更换一次培养基，控制温度为10～15℃，即为亲代保留培养。 1.4.3 处女蝇的收集 果蝇雌性生殖器光具有受精囊，可保留交配所得的大量精子，能使大量的卵受精，因此作品系间杂交时，必须选用处女蝇，而雌蝇刚羽化后一般12h之后交配，因此在把培养瓶内的果蝇除去后，8h内所收集到的雌蝇必定为处女蝇。 当需要从亲本取出所需的果蝇材料时，转移至25℃温箱培养，并且当亲本培养瓶中出现第一个蛹后，除去所有成虫或转瓶培养，每隔9h观察一次，此时出现的果蝇进行性别判断，分离出来的雌蝇必然为处女蝇。 果蝇杂交流程（2#♀╳6#♂和2#♂╳6#♀） 杂交前步骤 首先每一培养瓶要贴好标签，注明品系、杂交情况、时间、班别及姓名。 分别取黑腹果蝇原种2#和6#于两个培养瓶中，并培养7～8d，当培养瓶出现第一个蛹后，分别将果蝇原种除去。 然后2#培养瓶每隔9h取一次处女蝇，超过9h的雌蝇除去不用，可保留雄蝇，将取出处女雌和雄性果蝇分别放置于两个培养瓶中，直到