6种酶的测定--关松荫.doc

cellulase 纤维素酶 sucrose invertase 蔗糖转化酶 滴定法 1试剂配制 （1）20%蔗糖 （2）甲苯 （3）PH5.5醋酸盐-磷酸盐缓冲液 （4）33% KI液 （5）H2SO4（1：3） （6）淀粉指示剂：取0.5g淀粉溶于少许水中，加10ml煮沸的25%NaCl液，煮沸1min （7）0.1N Na2S2O3滴定液：配制方法与标定方法见多酚氧化酶测定 （8）菲林溶液：取34.64 g CuSO4.5H2O溶于蒸馏水，并稀释至500ml（a）取173g酒石酸钾钠和50gNaOH溶于蒸馏水，并稀释至500ml（b），使用前将（a）（b）按1：1混合 2操作步骤 取10g土壤置于100ml三角瓶中，用1.5ml甲苯处理15min。加10ml 20%蔗糖和10ml PH5.5醋酸盐-磷酸盐缓冲液，摇匀后放在37℃恒温箱中培养24h 培养结束后，加50ml蒸馏水，摇荡后过滤。取20ml滤液移于100ml三角瓶中，加10ml菲林溶液。在沸水浴上放置10min，冷却至室温后再加3ml 33%KI溶液和4ml H2SO4（1：3）。然后用0.1N Na2S2O3滴定，至终点前加淀粉指示剂，再滴定至蓝色消失。试验应设以水（20ml）代替基质的对照 蔗糖酶活性，用对照与试验的0.1N Na2S2O3滴定毫升数之差表示 β-glucosidase β-葡糖苷酶 peroxidase 过氧化物酶HRP xylanase ? 木聚糖酶 淀而成。配制浓度为1% （2）甲苯 （3）PH6.5 0.15M磷酸盐缓冲液 （4）铜-磷酸盐试剂：取28g无水K2HPO4和40g酒石酸钾钠，溶于700ml水中，加100ml 1N NaOH，然后加入80ml 10%CuSO4.5H2O溶液。溶解后，加入180g无水Na2SO4，将溶液稀释至1L并过滤后备用 （5）0.005N KI （6）2N H2SO4 (7)0.005N Na2S2O3。5H2O溶液。该工作夜由0.1N Na2S2O3原液稀释而成。为防止大气中CO2的影响，稀释1L溶液加2ml 10% NaOH (8)木糖的标准溶液（1ml含0.2mg木糖） 4操作步骤 取5g土置于50ml三角瓶中，加2ml甲苯。10min后，加5ml PH6.5磷酸缓冲液和5ml 1%木聚糖溶液。放在37℃恒温箱中培养5昼夜。 培养结束后，取5ml滤液移于大试管中，加5ml铜-磷酸盐试剂。塞好试管后，放在沸水浴上加热10min。这时，有红色氧化亚铜沉淀析出。待冷却后，为使亚铜氧化，沿管壁加5ml 0.005N KI溶液（不要混合）。然后迅速注入1.5 ml 2N H2SO4,并立即摇动混合液。剩余的KI用0.005 Na2S2O3进行回滴。根据KI的差，得出与当量铜量结合的碘化钾量。 为了计算反应液中生成的木聚糖，得到1mg木糖的0.005N CuO的毫克数，可用标准木糖液5ml，按上述方法沉淀，铜用硫代硫酸钠滴定。根据用于氧化铜的KI的量，查知其当量数（以0.005N CuO 的毫克数表示） 木聚糖酶活性，以1ml反应混合物中木糖的毫克数表示。试验设置以水代替基质的对照 phenol oxidase 多酚氧化酶 PPO 1分析意义 多酚氧化酶参与土壤有机组分中芳香族化合物的转化作用。土壤中的酚类物质在多酚氧化酶的作用下氧化生成醌。醌与氨基酸等通过一系列生物化学过程所合成最初的胡敏酸分子，所以，多酚氧化酶是腐殖化的一个媒介。它是土壤氧化花园酶中了解得比较多的一种酶。 2方法选择与原理 在空气存在的情况下，多酚氧化酶能酶